猪THRSP基因5侧翼区的SNPs、启动子效率及其与猪背膘厚之关联性研究
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 略词语表 | 第9-13页 |
| 猪脂肪代谢机理及其候选基因研究进展 | 第13-22页 |
| 引言 | 第22-23页 |
| 1 材料与方法 | 第23-35页 |
| ·材料 | 第23-26页 |
| ·供试样本采集 | 第23页 |
| ·载体和感受态细胞 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·软件工具 | 第24页 |
| ·溶液试剂配制 | 第24-26页 |
| ·猪耳组织DNA 的提取及检测 | 第26-27页 |
| ·猪耳组织DNA 的提取步骤 | 第26页 |
| ·DNA 浓度和纯度的检测 | 第26-27页 |
| ·引物设计和PCR 扩增及检测 | 第27-28页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·用于SNP 的引物设计 | 第27页 |
| ·用于报告基因的引物设计 | 第27页 |
| ·PCR 扩增 | 第27-28页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第28页 |
| ·RFLP 分析 | 第28页 |
| ·群体遗传学研究方法 | 第28-30页 |
| ·基因频率 | 第28-29页 |
| ·基因型频率 | 第29页 |
| ·群体杂合度 | 第29页 |
| ·多态信息含量 | 第29页 |
| ·群体Hardy-Weinberg 平衡检测 | 第29页 |
| ·基因型与背膘厚的关联分析 | 第29-30页 |
| ·猪THRSP 基因5’端序列克隆和测序 | 第30-33页 |
| ·PCR 产物的纯化-试剂盒法 | 第30页 |
| ·双酶切反应 | 第30-31页 |
| ·双酶切产物的纯化 | 第31页 |
| ·连接反应 | 第31页 |
| ·感受态细胞的制备（氯化钙法） | 第31-32页 |
| ·转化 | 第32页 |
| ·质粒DNA 的中量提取---试剂盒法 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第33页 |
| ·报告基因 | 第33-34页 |
| ·293T 细胞培养及传代 | 第33-34页 |
| ·细胞铺板及细胞转染 | 第34页 |
| ·细胞转染效率检测 | 第34页 |
| ·目的片段的结构分析与预测 | 第34-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-47页 |
| ·目的片段的序列分析 | 第35-38页 |
| ·目的片段的PCR 扩增结果 | 第35页 |
| ·目的片段的同源性分析 | 第35-36页 |
| ·目的片段的DNA 弯曲和重复序列分析 | 第36页 |
| ·目的片段转录因子绑定位点分析 | 第36-38页 |
| ·目的片段的酶切多态性 | 第38-40页 |
| ·A376G 和G98A 位点的联合酶切 | 第39页 |
| ·C229T 和T+9G 位点的联合酶切 | 第39-40页 |
| ·T400C 位点的Fnu4HI 酶切 | 第40页 |
| ·不同类型猪群的基因频率及其分布特点 | 第40-45页 |
| ·T400C 位点基因频率及其分布 | 第40-42页 |
| ·A376G 位点基因频率及其分布 | 第42页 |
| ·C229T 位点基因频率及其分布 | 第42-44页 |
| ·G98A 位点基因频率及其分布 | 第44-45页 |
| ·不同基因型的双报告基因表达分析 | 第45-46页 |
| ·不同基因型与猪背膘厚之关联分析 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-51页 |
| ·关于试验猪 | 第47页 |
| ·关于PCR 扩增 | 第47-49页 |
| ·模板质量 | 第47页 |
| ·引物设计 | 第47-48页 |
| ·引物的浓度 | 第48页 |
| ·PCR 反应温度 | 第48页 |
| ·镁离子浓度 | 第48页 |
| ·dNTP 质量与浓度 | 第48-49页 |
| ·群体遗传结构 | 第49页 |
| ·群体遗传平衡 | 第49页 |
| ·遗传多态性 | 第49页 |
| ·关于THRSP 基因的TP526 | 第49-51页 |
| ·反应元件 | 第49-50页 |
| ·TATA 盒 | 第50页 |
| ·DNA 弯曲指数与DNA-loop | 第50-51页 |
| 4 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介 | 第60页 |
