| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 文献综述 | 第14-25页 |
| 第一节 哺乳动物体细胞核移植的研究进展 | 第14-20页 |
| ·哺乳动物克隆技术简介 | 第14-15页 |
| ·体细胞克隆关键技术环节的进展 | 第15-18页 |
| ·供体细胞的准备 | 第15-16页 |
| ·受体卵母细胞的成熟 | 第16-17页 |
| ·卵母细胞的去核 | 第17页 |
| ·重构胚的融合与激活 | 第17-18页 |
| ·着床前胚胎培养 | 第18页 |
| ·克隆胚的移植 | 第18页 |
| ·体细胞克隆技术的应用 | 第18-19页 |
| ·问题与展望 | 第19-20页 |
| 第二节 表观修饰干预提高克隆效率 | 第20-25页 |
| ·DNA 甲基化概述 | 第20-21页 |
| ·表观修饰剂干预 | 第21-23页 |
| ·DNA 甲基化转移酶抑制剂 | 第22页 |
| ·组蛋白去乙酰化酶抑制剂 | 第22-23页 |
| ·氧肟类及其类似物 | 第22-23页 |
| ·短链脂肪酸类 | 第23页 |
| ·RNAi干预克隆胚表观修饰 | 第23-24页 |
| ·细胞提取物孵育干预克隆胚表观修饰 | 第24页 |
| 展望 | 第24-25页 |
| 引言 | 第25-27页 |
| 1 材料与方法 | 第27-37页 |
| ·试验材料 | 第27-30页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·主要耗材 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27-29页 |
| ·溶液配制 | 第29-30页 |
| ·试验方法 | 第30-34页 |
| ·显微操作针制备与装针 | 第30-31页 |
| ·猪卵母细胞的体外成熟 | 第31页 |
| ·脱卵丘 | 第31页 |
| ·卵母细胞孤雌激活 | 第31-32页 |
| ·六白猪耳成纤维细胞与梅山猪胎儿成纤维细胞的建系和培养 | 第32页 |
| ·体细胞的准备 | 第32页 |
| ·体细胞核移植 | 第32-33页 |
| ·重构卵的融合与激活 | 第33页 |
| ·胚胎培养 | 第33-34页 |
| ·囊胚总细胞数染色 | 第34页 |
| ·间接免疫荧光染色 | 第34页 |
| ·试验设计 | 第34-35页 |
| ·组蛋白去乙酰化酶VPA 处理对猪克隆胚胎体外发育能力的影响 | 第34页 |
| ·肌醇对猪孤雌胚胎和克隆胚胎体外发育能力的影响 | 第34-35页 |
| ·猪卵母细胞核重构胚激活方案的筛选 | 第35页 |
| ·猪孤雌胚的免疫荧光染色探求和优化 | 第35页 |
| ·在一种简便的激活方案下，使用TSA 对克隆胚发育能力的影响 | 第35页 |
| ·统计分析 | 第35-37页 |
| 2 结果 | 第37-47页 |
| ·表观修饰剂VPA 处理对克隆胚胎体外发育的影响 | 第37页 |
| ·在胚胎培养液添加肌醇对猪孤雌胚、克隆胚发育能力的影响 | 第37-38页 |
| ·猪卵母细胞/重构胚激活方案的筛选 | 第38-41页 |
| ·四种激活方案对猪卵母细胞孤雌胚发育能力的影响 | 第38-39页 |
| ·四种激活方案对猪胎儿成纤维细胞的核移植胚胎的发育能力的影响 | 第39-41页 |
| ·两种激活方案对于地方品种六白猪的耳成纤维体细胞的克隆胚的胚胎发育能力的影响 | 第41页 |
| ·猪孤雌胚和克隆胚DNA 甲基化染色程序的探求优化 | 第41-43页 |
| ·不同浓度渗透剂以及固定时间对染色的影响 | 第41-42页 |
| ·猪孤雌胚DNA 甲基化染色的抗体的稀释度和孵育时间 | 第42-43页 |
| ·进口与国产二抗的染色效果比较 | 第43页 |
| ·表观修饰剂TSA 对于克隆胚的发育及DNA 甲基化水平的影响 | 第43-47页 |
| ·TSA 处理不同时间对猪克隆胚胎早期发育的影响 | 第43页 |
| ·在简便的激活方案下，使用TSA 处理对六白猪克隆胚的卵裂率和囊胚率的影响 | 第43-44页 |
| ·在简便激活方案下，使用TSA 处理对梅山猪体细胞核移植胚胎的卵裂率和囊胚率的影响 | 第44-45页 |
| ·表观修饰剂TSA 对克隆囊胚的DNA 甲基化相对水平的影响 | 第45-47页 |
| 3 讨论 | 第47-52页 |
| ·表观修饰剂VPA 对克隆胚胎体外发育的影响 | 第47页 |
| ·关于在胚胎培养基中添加肌醇 | 第47页 |
| ·激活方案与孤雌胚/克隆胚发育能力 | 第47-48页 |
| ·猪孤雌胚和克隆胚的间接免疫荧光染色方法的建立和优化 | 第48-49页 |
| ·渗透(渗透剂)对染色程序的影响 | 第48页 |
| ·固定对染色程序的影响 | 第48-49页 |
| ·抗体的选择对染色程序的影响 | 第49页 |
| ·染色的拍照 | 第49页 |
| ·猪孤雌胚和克隆胚免疫荧光染色程序的优化 | 第49页 |
| ·表观修饰剂TSA 对猪克隆发育能力和DNA 甲基化水平的影响 | 第49-52页 |
| ·关于表观遗传修饰剂与克隆胚胎发育 | 第49-50页 |
| ·激活方案与TSA 处理 | 第50页 |
| ·DNA 甲基化与克隆胚发育 | 第50-52页 |
| 4 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 致谢 | 第60-62页 |
| 个人简历 | 第62页 |
