| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-14页 |
| 目录 | 第14-18页 |
| 缩写词简表 | 第18-20页 |
| 前言 | 第20-26页 |
| (一) 抗独特型抗体疫苗的分类及优越性 | 第20-23页 |
| (二) 细胞因子在肿瘤疫苗中的应用 | 第23页 |
| (三) hu-PBL-SCID小鼠模型在肿瘤研究中的应用 | 第23-26页 |
| 技术路线 | 第26-27页 |
| 第一章 鼻咽癌人源双特异性抗独特型抗体疫苗的制备及活性鉴定 | 第27-51页 |
| 第一节 材料和方法 | 第27-40页 |
| 1 材料 | 第27-31页 |
| ·细胞系 | 第27页 |
| ·质粒和菌株 | 第27-28页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第28页 |
| ·PCR引物 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·主要溶液配方 | 第29-31页 |
| 2 方法 | 第31-40页 |
| ·原核表达载体pET25b-G22,pET25b-I50,pET25b-G22-I50的构建 | 第31-35页 |
| ·原核表达蛋白G22,I50,G22-I50的表达与鉴定 | 第35-39页 |
| ·统计学分析 | 第39-40页 |
| 第二节 结果 | 第40-49页 |
| 1 目的基因的扩增 | 第40页 |
| 2 重组原核表达载体的构建和鉴定 | 第40-45页 |
| 3 重组蛋白的表达及表达蛋白的分布 | 第45-48页 |
| 4 蛋白的活性鉴定 | 第48-49页 |
| 第三节 讨论 | 第49-51页 |
| 第二章 双特异性抗独特型抗体体外抗肿瘤免疫机制研究 | 第51-64页 |
| 第一节 材料和方法 | 第51-58页 |
| 1 材料 | 第51-54页 |
| ·细胞系 | 第51页 |
| ·质粒及菌株 | 第51页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第51-52页 |
| ·主要仪器 | 第52页 |
| ·常用溶液配方 | 第52-54页 |
| 2 方法 | 第54-58页 |
| ·蛋白的制备及验证 | 第54页 |
| ·外周血单个核细胞的增殖作用 | 第54-55页 |
| ·检测各组培养上清中细胞因子的含量 | 第55-56页 |
| ·流式细胞术检测各组PBMC亚群的变化 | 第56页 |
| ·细胞毒性实验 | 第56-57页 |
| ·统计学分析 | 第57-58页 |
| 第二节 结果 | 第58-62页 |
| 1 抗独特型抗体对PBMC的体外增殖作用 | 第58-59页 |
| 2 刺激后淋巴细胞培养上清中细胞因子水平的变化 | 第59页 |
| 3 体外刺激后淋巴细胞表型的变化情况 | 第59-60页 |
| 4 细胞毒性试验 | 第60-62页 |
| 第三节 讨论 | 第62-64页 |
| 第三章 双特异性抗独特型抗体体内抗肿瘤免疫机制研究 | 第64-94页 |
| 第一节 材料和方法 | 第64-75页 |
| 1 材料 | 第64-67页 |
| ·细胞系 | 第64页 |
| ·外周静脉血 | 第64页 |
| ·实验动物 | 第64页 |
| ·引物 | 第64-65页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第65页 |
| ·主要仪器 | 第65-66页 |
| ·主要溶液配方 | 第66-67页 |
| 2 方法 | 第67-75页 |
| ·双特异性抗独特型抗体疫苗诱导的免疫应答研究 | 第67-71页 |
| ·双特异性抗独特型抗体疫苗的免疫保护与免疫治疗作用 | 第71-74页 |
| ·统计学分析 | 第74-75页 |
| 第二节 结果 | 第75-90页 |
| 1 G22-I50,G22,I50免疫Balb/c小鼠后的免疫应答情况 | 第75-79页 |
| ·体液免疫反应 | 第75-77页 |
| ·淋巴细胞增殖反应 | 第77-78页 |
| ·细胞因子表达情况 | 第78-79页 |
| 2 G22-I50,G22,I50免疫hu-PBL-SCID小鼠后的免疫保护与治疗机制研究 | 第79-90页 |
| ·hu-PBL-SCID模型的鉴定 | 第79-80页 |
| ·各疫苗的免疫保护作用 | 第80-82页 |
| ·各疫苗的免疫治疗作用 | 第82-83页 |
| ·肿瘤组织病理学观察 | 第83-85页 |
| ·免疫组化法检测肿瘤周围浸润的CD3~+T细胞的情况 | 第85-86页 |
| ·细胞因子分泌情况 | 第86-87页 |
| ·细胞毒性试验 | 第87-88页 |
| ·疫苗免疫保护/治疗组小鼠肿瘤组织中CD4~+CD25~+Treg细胞的比例检测 | 第88-90页 |
| 第三节 讨论 | 第90-94页 |
| 第四章 含人GM-CSF的双特异性抗独特型抗体融合蛋白疫苗免疫应答及免疫保护机制研究 | 第94-126页 |
| 第一节 材料和方法 | 第94-106页 |
| 1 材料 | 第94-98页 |
| ·细胞系 | 第94页 |
| ·实验动物 | 第94页 |
| ·引物 | 第94-95页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第95-96页 |
| ·主要仪器 | 第96页 |
| ·主要溶液配方 | 第96-98页 |
| 2 方法 | 第98-106页 |
| ·pET25b-GM-CSF-G22-I50/pET25b-GM-CSF载体的构建 | 第98-100页 |
| ·GM-CSF-G22-I50/GM-CSF蛋白的诱导表达、纯化、复性 | 第100-101页 |
| ·GM-CSF-G22-I50/GM-CSF蛋白活性的鉴定 | 第101页 |
| ·GM-CSF-G22-I50蛋白诱导的免疫应答反应情况 | 第101-103页 |
| ·GM-CSF-G22-I50蛋白的免疫保护作用 | 第103-105页 |
| ·统计学分析 | 第105-106页 |
| 第二节 结果 | 第106-122页 |
| 1 目的基因的获得 | 第106页 |
| 2 pET25b-GM-CSF-G22-I50和pET25b-GM-CSF载体的构建和鉴定 | 第106-108页 |
| 3 GM-CSF-G22-I50/GM-CSF蛋白的表达 | 第108-110页 |
| 4 GM-CSF-G22-I50/GM-CSF蛋白活性的鉴定 | 第110-111页 |
| 5 GM-CSF-G22-I50免疫小鼠后的免疫应答情况 | 第111-116页 |
| ·间接ELISA法检测GM-CSF-G22-I50免疫小鼠的体液免疫反应情况 | 第111页 |
| ·竞争抑制ELISA法检测GM-CSF-G22-I50免疫小鼠的体液免疫反应情况. | 第111-113页 |
| ·淋巴细胞增殖实验 | 第113-114页 |
| ·细胞毒性实验 | 第114-115页 |
| ·细胞因子表达情况 | 第115-116页 |
| 6 GM-CSF-G22-I50免疫小鼠后的免疫保护情况 | 第116-122页 |
| ·各实验组小鼠肿瘤生长特性的比较 | 第116页 |
| ·各实验组小鼠生存状态的比较 | 第116-117页 |
| ·疫苗免疫鼠肿瘤组织病理检查 | 第117-118页 |
| ·疫苗免疫鼠肿瘤组织中各转录因子的表达情况 | 第118-119页 |
| ·疫苗免疫鼠肿瘤组织中ITAC及脾细胞趋化因子受体CXCR3的表达 | 第119-120页 |
| ·脾脏淋巴细胞培养上清中细胞因子的含量 | 第120-122页 |
| 第三节 讨论 | 第122-126页 |
| 结论 | 第126-127页 |
| 参考文献 | 第127-141页 |
| 文献综述 | 第141-148页 |
| 参考文献 | 第145-148页 |
| 致谢 | 第148-149页 |
| 在读期间主要的研究成果 | 第149-150页 |
