人脂联素基因的原核表达纯化、抗体制备及应用
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 英文缩略词表 | 第11-12页 |
| 1 绪论 | 第12-20页 |
| ·脂联素的发现及来源 | 第12页 |
| ·脂联素的结构 | 第12-13页 |
| ·脂联素的基因结构 | 第12页 |
| ·脂联素的蛋白结构 | 第12-13页 |
| ·脂联素受体 | 第13-14页 |
| ·脂联素的可能作用机制 | 第14-15页 |
| ·脂联素的生物学活性 | 第15-16页 |
| ·脂联素与Ⅱ型糖尿病 | 第15页 |
| ·脂联素与动脉粥样硬化 | 第15-16页 |
| ·脂联素与肥胖 | 第16页 |
| ·脂联素与非酒精性脂肪性肝病 | 第16页 |
| ·脂联素与肿瘤 | 第16页 |
| ·影响脂联素的因素 | 第16页 |
| ·国内人脂联素的研究进展 | 第16-18页 |
| ·人脂联素基因的重组表达研究进展 | 第16-17页 |
| ·国内ELISA检测人脂联素研究进展 | 第17-18页 |
| ·脂联素检测的意义 | 第18-19页 |
| ·实验技术路线 | 第19-20页 |
| 2 实验材料 | 第20-29页 |
| ·菌种和载体 | 第20-21页 |
| ·组织及实验动物 | 第21页 |
| ·酶及其他制剂 | 第21页 |
| ·试剂盒 | 第21页 |
| ·化学试剂 | 第21-22页 |
| ·主要试剂的配制 | 第22-27页 |
| ·主要仪器及厂家 | 第27-29页 |
| 3 方法 | 第29-46页 |
| ·ADPN基因的克隆及鉴定 | 第29-36页 |
| ·引物的设计合成及引物稀释 | 第29-30页 |
| ·脂肪组织总RNA的提取及RNA浓度测定 | 第30页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第30-31页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第31页 |
| ·PCR产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第31-32页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第32页 |
| ·纯化的PCR产物和载体的双酶切 | 第32-33页 |
| ·目的片段与pET-CKS载体的连接 | 第33页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·连接产物的转化 | 第34页 |
| ·阳性质粒的筛选与鉴定 | 第34-36页 |
| ·菌种的保藏 | 第36页 |
| ·重组ADPN蛋白的诱导表达及纯化 | 第36-41页 |
| ·重组ADPN蛋白的初步诱导表达 | 第36页 |
| ·重组ADPN蛋白的可溶性分析 | 第36-38页 |
| ·重组ADPN蛋白的Western Blot鉴定 | 第38页 |
| ·重组ADPN蛋白诱导表达条件的优化 | 第38-39页 |
| ·重组ADPN蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·重组ADPN蛋白浓度的测定 | 第40页 |
| ·包涵体的复性 | 第40页 |
| ·包涵体复性效率的检测 | 第40-41页 |
| ·ADPN多克隆抗体的制备及标记 | 第41-44页 |
| ·抗血清的制备 | 第41页 |
| ·间接ELISA检测兔血清效价 | 第41-42页 |
| ·双向琼脂双扩散实验 | 第42页 |
| ·兔抗ADPN多克隆抗体的纯化 | 第42-43页 |
| ·兔抗ADPN多克隆抗体的标记 | 第43-44页 |
| ·双抗体夹心ELISA检测模型的初步建立 | 第44-46页 |
| ·包被抗体和酶标抗体工作浓度的选择 | 第44-45页 |
| ·反映孵育时间的优化 | 第45页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第45页 |
| ·临床检测 | 第45-46页 |
| 4 结果 | 第46-58页 |
| ·脂肪组织RNA的提取 | 第46页 |
| ·ADPN基因的RT-PCR扩增 | 第46页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第46-49页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第46-47页 |
| ·双酶切鉴定 | 第47页 |
| ·测序鉴定 | 第47-49页 |
| ·重组ADPN蛋白的可溶性分析 | 第49-50页 |
| ·Western Blot鉴定 | 第50页 |
| ·重组蛋白诱导表达条件的优化 | 第50-52页 |
| ·诱导时间的优化 | 第50-51页 |
| ·诱导温度的优化 | 第51页 |
| ·诱导剂浓度的优化 | 第51-52页 |
| ·重组ADPN蛋白的纯化 | 第52-53页 |
| ·重组ADPN蛋白浓度的测定 | 第53页 |
| ·重组ADPN蛋白的复性 | 第53页 |
| ·间接ELISA检测兔血清效价 | 第53-54页 |
| ·双向琼脂扩散实验 | 第54-55页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第55页 |
| ·最佳包被抗体稀释度和酶标抗体稀释度的确定 | 第55-56页 |
| ·抗原抗体反应时间的优化 | 第56页 |
| ·标准曲线的制作 | 第56-57页 |
| ·临床实验 | 第57-58页 |
| 5 讨论 | 第58-62页 |
| ·ADPN基因的克隆 | 第58页 |
| ·载体及宿主菌的选择 | 第58-59页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第59页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第59页 |
| ·包涵体复性 | 第59-60页 |
| ·包涵体的形成 | 第59页 |
| ·包涵体的分离纯化 | 第59-60页 |
| ·包涵体的复性 | 第60页 |
| ·动物免疫 | 第60页 |
| ·抗血清效价的测定 | 第60-61页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第61页 |
| ·双抗体夹心检测模型的建立 | 第61-62页 |
| 6 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 附录 | 第69-71页 |
| 学习间发表的学术论文与研究成果 | 第71页 |
