| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-23页 |
| ·引言 | 第12页 |
| ·植物适应低磷的分子机制 | 第12-22页 |
| ·PHR对磷信号的调控 | 第12-13页 |
| ·IPS对磷信号的调控 | 第13-14页 |
| ·miR399和PHO2对磷信号的调控 | 第14-18页 |
| ·磷酸盐转运子在磷吸收和转运中的作用 | 第18-22页 |
| ·本研究的意义、目的和创新之处 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-39页 |
| ·水稻材料 | 第23页 |
| ·用于遗传转化的水稻磷酸盐转运子基因序列分析 | 第23-24页 |
| ·实验所用到的菌株、质粒、载体和感受态细胞 | 第24页 |
| ·遗传转化载体的构建和转化 | 第24-26页 |
| ·骨架载体构建 | 第24-25页 |
| ·超表达载体构建 | 第25-26页 |
| ·遗传转化 | 第26页 |
| ·DNA提取、转基因植株PCR阳性检测及转基因拷贝数检测 | 第26-28页 |
| ·DNA提取 | 第26-27页 |
| ·PCR阳性检测 | 第27页 |
| ·转基因Southern检测 | 第27-28页 |
| ·RNA的抽提、反转录及杂交 | 第28页 |
| ·RNA的抽提,反转录 | 第28页 |
| ·基因表达Northern检测 | 第28页 |
| ·转基因植株超表达检测 | 第28页 |
| ·水培试验及性状考察 | 第28-30页 |
| ·转基因植株的表型筛选 | 第29页 |
| ·OsPT2超表达株系T2代纯合体的筛选 | 第29-30页 |
| ·OsPT2转基因植株的共分离检测 | 第30页 |
| ·OsPT2突变体的水培表型鉴定 | 第30页 |
| ·生理性状考察 | 第30-33页 |
| ·总磷浓度的测定方法 | 第30-31页 |
| ·有效磷浓度的测定方法 | 第31-32页 |
| ·磷吸收速率试验测定方法 | 第32-33页 |
| ·各种磷浓度条件下的表型特征与生理特征的考察 | 第33页 |
| ·宽范围磷梯度水培实验 | 第33页 |
| ·窄范围磷梯度实验 | 第33页 |
| ·土培试验及性状考察 | 第33-34页 |
| ·水稻Afymatrix基因芯片分析 | 第34页 |
| ·PCR、RT-PCR和Real-time PCR的检测 | 第34-35页 |
| ·杂交后代的鉴定和培养 | 第35-36页 |
| ·酵母单杂交 | 第36-38页 |
| ·蛋白质凝胶阻滞 | 第38-39页 |
| ·数据收集、整理与统计分析 | 第39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-81页 |
| ·对几个磷酸盐转运子基因的获得及序列分析 | 第39-42页 |
| ·对OsPT2基因启动子PHR1结合位点的分析 | 第40-41页 |
| ·对OsPT2蛋白质结构的分析 | 第41-42页 |
| ·转化载体的构建及遗传转化 | 第42-43页 |
| ·TO代转基因植株PCR阳性分析 | 第43-44页 |
| ·转基因植株超量表达检测 | 第44-46页 |
| ·TO代转基因植株Southern拷贝数分析 | 第46页 |
| ·转基因植株的表型筛选 | 第46-47页 |
| ·OsPT2转基因植株的共分离检测 | 第47-51页 |
| ·35S:OsPT2-1的磷吸收速率实验 | 第51-52页 |
| ·35S:OsPT2-1的磷梯度水培实验 | 第52-58页 |
| ·宽范围磷梯度水培实验 | 第52-55页 |
| ·窄范围磷梯度水培实验 | 第55-58页 |
| ·ospt2突变体的鉴定及表型分析 | 第58-63页 |
| ·ospt2突变体的鉴定 | 第58-60页 |
| ·ospt2突变体的表型分析 | 第60-62页 |
| ·ospt2突变体的有效磷以及总磷分析 | 第62-63页 |
| ·Affymetrix芯片分析结果 | 第63-65页 |
| ·磷代谢相关基因之间的表达调控关系 | 第65-70页 |
| ·OsPT2同OsPHR2以及OsPH02之间的表达调控关系 | 第66-67页 |
| ·OsIPS1同OsPHR2以及OsPH02之间的表达调控关系 | 第67-68页 |
| ·OsPHO2同OsPHR2,OsIPS 1以及miR399之间的表达调控关系 | 第68-70页 |
| ·OsPT2基因同OsPHR2以及OsPH02遗传学水平的调控关系 | 第70-79页 |
| ·OsPT2基因同OsPHR2遗传学水平的调控关系 | 第70-76页 |
| ·OsPT2基因同OsPHO2遗传学水平的调控关系 | 第76-79页 |
| ·OsPHR2蛋白能够与OsPT2基因直接结合 | 第79-81页 |
| ·酵母单杂交 | 第79-80页 |
| ·凝胶阻滞电泳 | 第80-81页 |
| ·磷代谢路径中上游基因调控OsPT2的两种途径 | 第81页 |
| 4 讨论 | 第81-86页 |
| ·OsPT2基因对磷吸收转运的影响 | 第81-85页 |
| ·OsPT2主导OsPHR2介导的地上部过量的磷积累 | 第85-86页 |
| 5 展望 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 附录A 基本实验操作步骤 | 第99-106页 |
| Protocol 1:Total DNA extraction with CTAB method | 第99-100页 |
| Protocol 2:RNA isolation with TRIzol reagent | 第100页 |
| Protocol 3:Reverse transcription PCR | 第100-102页 |
| Protocol 4:Northern hybridization | 第102-105页 |
| Protocol 5:GUS staining protocol | 第105-106页 |
| 附录B 简历 | 第106-107页 |
