| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-43页 |
| ·蓝藻遗传学背景 | 第15-29页 |
| ·蓝藻基因转移系统的建立 | 第15-21页 |
| ·遗传转化 | 第15-19页 |
| ·接合转移 | 第19-21页 |
| ·噬藻体侵染系统 | 第21页 |
| ·蓝藻基因工程载体 | 第21-25页 |
| ·穿梭表达载体 | 第22-23页 |
| ·同源重组载体 | 第23-25页 |
| ·蓝藻基因组学研究进展 | 第25-29页 |
| ·蓝藻基因组研究的数据库 | 第25-27页 |
| ·几种常见蓝藻基因组信息 | 第27-29页 |
| ·报告基因的选择及应用 | 第29-31页 |
| ·绿色荧光蛋白基因(gfp) | 第30-31页 |
| ·β-半乳糖苷酶报告基因(lacZ) | 第31页 |
| ·外源基因在蓝藻中表达的研究现状 | 第31-34页 |
| ·蓝藻表达外源基因的优势 | 第31-34页 |
| ·蓝藻表达外源基因的不足 | 第34页 |
| ·外源基因高效表达及调控策略 | 第34-41页 |
| ·转录水平调控外源基因的高效表达 | 第34-40页 |
| ·启动子的特点 | 第34-35页 |
| ·蓝藻中常用启动子的介绍 | 第35-38页 |
| ·利用生物信息学进行蓝藻启动子筛选 | 第38-40页 |
| ·翻译水平调控外源基因的高效表达 | 第40-41页 |
| ·SD序列对外源基因表达的影响 | 第40页 |
| ·遗传密码偏好性对外源基因表达的影响 | 第40-41页 |
| ·本研究的目的与总体设计 | 第41-43页 |
| 第二章 集胞藻6803同源重组整合平台的构建 | 第43-55页 |
| 1 材料与方法 | 第43-46页 |
| ·质粒、菌株和蓝藻藻种 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·蓝藻的培养 | 第43-44页 |
| ·蓝藻基因组总DNA的抽提 | 第44页 |
| ·PCR反应 | 第44-46页 |
| ·同源重组整合平台的构建 | 第46页 |
| ·蓝藻的转化 | 第46页 |
| ·转基因蓝藻P0的分子检测 | 第46页 |
| ·转基因蓝藻P0中eGFP表达分析 | 第46页 |
| 2. 结果与分析 | 第46-54页 |
| ·上游载体的构建 | 第46-48页 |
| ·下游载体的构建 | 第48-49页 |
| ·pUC-Kan的构建 | 第49-50页 |
| ·pUC-efgp的构建 | 第50-51页 |
| ·P0载体的构建 | 第51-52页 |
| ·转基因P0藻株的获得与分子检测 | 第52-53页 |
| ·转基因P0藻株中eGFP表达分析 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-55页 |
| 第三章 GroESL启动子对蓝藻中外源egfp基因表达的影响 | 第55-76页 |
| 1 材料与方法 | 第56-59页 |
| ·质粒、菌株和蓝藻藻种 | 第56页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·蓝藻的培养 | 第56页 |
| ·同源重组载体Pg和Pg-s的构建 | 第56-58页 |
| ·蓝藻的转化 | 第58页 |
| ·转基因蓝藻的分子检测 | 第58页 |
| ·生长曲线的测定 | 第58-59页 |
| ·蛋白定量 | 第59页 |
| ·表达产物的Western blot检测 | 第59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-75页 |
| ·异源groESL启动子对外源egfp基因表达的影响 | 第59-67页 |
| ·同源重组载体Pg的构建 | 第60-61页 |
| ·转基因Pg藻株的获得及分子检测 | 第61-62页 |
| ·不同生长期对外源eGFP表达的影响 | 第62-64页 |
| ·不同诱导温度对外源eGFP表达的影响 | 第64-65页 |
| ·不同诱导时间对eGFP表达的影响 | 第65-67页 |
| ·异源groESL启动子及SD序列对外源基因表达的影响 | 第67-75页 |
| ·同源重组载体Pg-s的构建 | 第67-68页 |
| ·转基因Pg-s藻株的获得及分子检测 | 第68-69页 |
| ·不同生育期对外源eGFP表达的影响 | 第69-71页 |
| ·不同诱导温度对Pg-s藻株中外源eGFP表达的影响 | 第71-72页 |
| ·不同诱导时间对Pg-s藻株中外源eGFP表达的影响 | 第72-73页 |
| ·SD序列对外源基因表达的影响 | 第73-75页 |
| 3 讨论 | 第75-76页 |
| 第四章 Cpcp启动子对蓝藻中外源egfp基因表达的影响 | 第76-87页 |
| 1 材料与方法 | 第76-78页 |
| ·质粒、菌株和蓝藻藻种 | 第76页 |
| ·主要试剂 | 第76页 |
| ·蓝藻培养 | 第76-77页 |
| ·同源重组载体Pc的构建 | 第77-78页 |
| ·蓝藻的转化 | 第78页 |
| ·转基因蓝藻的分子检测 | 第78页 |
| ·生长曲线的测定 | 第78页 |
| ·蛋白定量 | 第78页 |
| ·表达产物的Western blot检测 | 第78页 |
| 2 结果与分析 | 第78-85页 |
| ·同源重组载体Pc的构建 | 第78-79页 |
| ·转基因Pc藻株的获得及分子检测 | 第79-81页 |
| ·不同光照强度对外源eGFP表达的影响 | 第81-82页 |
| ·不同光照时间对外源eGFP表达的影响 | 第82-83页 |
| ·不同CO_2浓度对外源eGFP表达的影响 | 第83-85页 |
| 3 讨论 | 第85-87页 |
| 第五章 P330对蓝藻中外源egfp基因表达的影响 | 第87-103页 |
| 1 材料与方法 | 第87-90页 |
| ·质粒、菌株和蓝藻藻种 | 第87页 |
| ·主要试剂 | 第87-88页 |
| ·蓝藻培养 | 第88页 |
| ·启动子区域的预测 | 第88页 |
| ·P330的克隆及载体的构建 | 第88-89页 |
| ·蓝藻的转化 | 第89页 |
| ·转基因P330藻株的分子检测 | 第89页 |
| ·生长曲线的测定 | 第89-90页 |
| ·蛋白定量 | 第90页 |
| ·表达产物的Western blot检测 | 第90页 |
| 2 结果与分析 | 第90-101页 |
| ·目的基因的选择及信息学预测 | 第90-91页 |
| ·高光对集胞藻6803中NdhK表达的影响 | 第91-92页 |
| ·P330载体的构建 | 第92-93页 |
| ·转基因P330藻株的获得及分子检测 | 第93-95页 |
| ·生长期对P330藻株中外源eGFP表达的影响 | 第95-97页 |
| ·不同高光诱导时间对外源eGFP表达的影响 | 第97-98页 |
| ·高低二氧化碳对P330藻株中eGFP表达的影响 | 第98-100页 |
| ·几种启动子作用的比较 | 第100-101页 |
| 3 讨论 | 第101-103页 |
| 第六章 总结与展望 | 第103-107页 |
| 1 总结 | 第103-104页 |
| 2 展望 | 第104-107页 |
| 附录Ⅰ:发表文章目录 | 第107-108页 |
| 附录Ⅱ:缩写 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-125页 |
| 致谢 | 第125页 |
