| 英文缩略词 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-14页 |
| 英文摘要 | 第14-17页 |
| 技术路线 | 第17-18页 |
| 前言 | 第18-20页 |
| 第一部分:kinectin(D2选择剪接区)基因mRNA在7404肝癌细胞株的表达检测 | 第20-38页 |
| 1 实验材料与设备 | 第20-24页 |
| 2 实验方法 | 第24-30页 |
| ·人肝癌细胞株bel-7404的常规培养、传代、冻存及复苏 | 第24-26页 |
| ·kinectin(D2选择剪接区)引物的设计 | 第26-27页 |
| ·7404 肝癌细胞株总RNA的提取 | 第27页 |
| ·7404 肝癌细胞株RNA检测 | 第27-28页 |
| ·7404 肝癌细胞株cDNA的合成 | 第28页 |
| ·7404 肝癌细胞株cDNA质量检测 | 第28-29页 |
| ·kinectin目的基因的检测 | 第29-30页 |
| 3 实验结果 | 第30-33页 |
| ·7404 肝癌细胞株常规培养光镜像 | 第30-31页 |
| ·7404 肝癌细胞株总RNA质量检测 | 第31-32页 |
| ·7404 肝癌细胞株cDNA质量检测 | 第32-33页 |
| ·kinectin目的基因的检测 | 第33页 |
| 4 讨论 | 第33-37页 |
| 5 小结 | 第37-38页 |
| 第二部分:Kinectin-MBP融合蛋白的表达、分离及纯化 | 第38-57页 |
| 1 实验材料与设备 | 第38-46页 |
| 2 实验方法 | 第46-50页 |
| ·kinectin目的基因的体外重组 | 第46页 |
| ·融合蛋白Kinectin-MBP的表达及纯化 | 第46-48页 |
| ·融合蛋白的透析 | 第48-49页 |
| ·Factor Xa蛋白酶酶切kinectin-MBP融合蛋白 | 第49页 |
| ·kinectin-MBP融合蛋白的冻干 | 第49页 |
| ·Bradford方法测定kinectin-MBP蛋白浓度 | 第49页 |
| ·麦芽糖结合蛋白(MBP)的表达、纯化 | 第49-50页 |
| ·SMP-30-MBP蛋白的表达、纯化 | 第50页 |
| 3 实验结果 | 第50-53页 |
| ·融合蛋白kinectin-MBP表达纯化 | 第50-51页 |
| ·MBP电泳结果 | 第51-52页 |
| ·kinectin-MBP质量检测结果 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 5 小结 | 第55-57页 |
| 第三部分:Kinectin-MBP蛋白致敏的DC瘤苗对肝癌细胞杀伤活性的探讨 | 第57-82页 |
| 1 实验材料与设备 | 第57-59页 |
| 2 实验方法 | 第59-66页 |
| ·正常人外周DC的体外诱导培养 | 第59-60页 |
| ·DC的鉴定 | 第60页 |
| ·致敏DC的制备 | 第60-61页 |
| ·各组致敏DC上清液IL-12、IFN-γ含量的检测 | 第61-62页 |
| ·同种T淋巴细胞(效应细胞)的分离、纯化 | 第62-63页 |
| ·致敏DC体外诱导自体T淋巴细胞增殖能力的检测 | 第63页 |
| ·致敏DC诱导自体T淋巴细胞增殖分化为CTL | 第63-64页 |
| ·致敏DC诱导的CTL对BEL-7404肝癌细胞杀伤活性检测 | 第64-66页 |
| ·统计学方法 | 第66页 |
| 3 实验结果 | 第66-74页 |
| ·光学显微镜下DC的形态学观察 | 第66-68页 |
| ·扫描电子显微镜DC的形态观察 | 第68-69页 |
| ·流式细胞术DC表型检测结果 | 第69-71页 |
| ·细胞因子IFN-γ、IL-12的检测 | 第71页 |
| ·致敏DC体外诱导的自体T淋巴细胞增殖效应 | 第71-73页 |
| ·致敏DC诱导的CTL对肝癌细胞的杀伤作用 | 第73-74页 |
| 4 讨论 | 第74-81页 |
| 5 小结 | 第81-82页 |
| 第四部分:kinectin蛋白激活的T细胞亚群检测及生物学意义 | 第82-91页 |
| 1 实验材料与设备 | 第82-83页 |
| 2 实验方法 | 第83-84页 |
| ·细胞悬液涂片的制备 | 第83页 |
| ·免疫组化染色 | 第83-84页 |
| ·实验结果判断 | 第84页 |
| ·统计学处理 | 第84页 |
| 3 实验结果 | 第84-87页 |
| ·免疫组化检测结果 | 第84-86页 |
| ·T细胞亚群增殖百分比检测 | 第86-87页 |
| 4 讨论 | 第87-89页 |
| 5 小结 | 第89-91页 |
| 本课题创新点 | 第91-92页 |
| 全文小结 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-100页 |
| 综述 树突状细胞与肝癌 | 第100-120页 |
| 1 树突状细胞及其生物学特性 | 第100-102页 |
| 2 树突状细胞在肿瘤发生、发展、预后中的作用 | 第102-104页 |
| 3 HCC患者免疫功能状态与树突状细胞的关联 | 第104-105页 |
| 4 树突状细胞与肝癌的免疫逃逸 | 第105-107页 |
| 5 DC疫苗与肝癌免疫治疗的研究现况 | 第107-112页 |
| ·DC疫苗治疗肝癌的基础实验研究 | 第107-109页 |
| ·DC疫苗治疗肝癌的临床研究 | 第109-112页 |
| 6 DC疫苗肝癌免疫治疗现存问题及前景 | 第112页 |
| 参考文献 | 第112-120页 |
| 致谢 | 第120-122页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文目录 | 第122页 |
