| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 绪论 | 第11-12页 |
| 第一章 脑心肌炎病毒研究进展 | 第12-28页 |
| 1 病毒分类 | 第12-13页 |
| 2 病毒生物学特性 | 第13-17页 |
| 2.1 理化特性 | 第13-14页 |
| 2.2 培养特性 | 第14页 |
| 2.3 基因组结构及编码蛋白 | 第14-17页 |
| 3 致病机理 | 第17-18页 |
| 4 反向遗传技术 | 第18-21页 |
| 参考文献 | 第21-28页 |
| 第二章 I型干扰素信号通路研究进展 | 第28-40页 |
| 1 干扰素的分类 | 第28页 |
| 2 I型干扰素的产生及其转导机理 | 第28-31页 |
| 3 微RNA科病毒逃避宿主先天性免疫应答机制 | 第31-34页 |
| 参考文献 | 第34-40页 |
| 第三章 I型干扰素信号通路重要分子的克隆与表达 | 第40-52页 |
| 1 材料与方法 | 第40-45页 |
| 1.1 菌株,细胞及载体 | 第40-41页 |
| 1.2 主要试剂 | 第41页 |
| 1.3 I型干扰素信号通路重要分子表达质粒的构建与鉴定 | 第41-45页 |
| 1.3.1 1RNA的提取及cDNA的合成 | 第41页 |
| 1.3.2 PCR扩增及产物回收及纯化 | 第41-43页 |
| 1.3.3 片段与载体的酶切、连接及转化 | 第43页 |
| 1.3.4 质粒的提取 | 第43-44页 |
| 1.3.5 重组质粒双酶切及测序鉴定 | 第44页 |
| 1.3.6 质粒转染 | 第44页 |
| 1.3.7 Western blot | 第44-45页 |
| 2 结果 | 第45-46页 |
| 2.1 目的片段PCR扩增 | 第45页 |
| 2.2 重组质粒双酶切及测序鉴定 | 第45-46页 |
| 2.3 Western blot鉴定 | 第46页 |
| 3 讨论 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 第四章 脑心肌炎病毒2C蛋白对IFN-β信号通路的影响 | 第52-72页 |
| 1 材料与方法 | 第53-57页 |
| 1.1 菌株,细胞及载体 | 第53页 |
| 1.2 主要试剂 | 第53页 |
| 1.3 双荧光素酶报告基因检测系统试验 | 第53-54页 |
| 1.4 荧光定量PCR检测方法 | 第54-55页 |
| 1.5 免疫共沉淀实验 | 第55页 |
| 1.6 EMCV非结构蛋白及2C截短体重组质粒的构建 | 第55-57页 |
| 1.6.1 PCR扩增及产物回收及纯化 | 第55-57页 |
| 1.6.2 片段与载体的连接及转化 | 第57页 |
| 1.6.3 重组质粒双酶切鉴定 | 第57页 |
| 2 结果 | 第57-64页 |
| 2.1 EMCV非结构蛋白PCR扩增及表达质粒的构建与鉴定 | 第57-58页 |
| 2.2 2C截短基因PCR扩增及其截短体的构建与鉴定 | 第58-59页 |
| 2.3 EMCV非结构蛋白抑制IFN-β活性比较 | 第59-60页 |
| 2.4 2C蛋白对IFN-β产生及效应基因转录水平的影响 | 第60-61页 |
| 2.5 比较2C蛋白与IFN-β信号通路分子互作对IFN-β启动子活性影响 | 第61-62页 |
| 2.6 2C蛋白与MDA5在293A细胞中存在互作 | 第62-63页 |
| 2.7 N端1-31位氨基酸介导2C抑制I型IFN-β产生 | 第63-64页 |
| 3 讨论 | 第64-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 第五章 表达猪圆环病毒2型ORF2基因的重组脑心肌炎病毒的构建与鉴定 | 第72-86页 |
| 1 材料与方法 | 第73-76页 |
| 1.1 菌株,细胞及载体 | 第73页 |
| 1.2 主要试剂 | 第73页 |
| 1.3 感染性cDNA克隆质粒pCMV rNJ08/cap的构建 | 第73-74页 |
| 1.4 病毒拯救 | 第74页 |
| 1.5 分子遗传标记鉴定 | 第74-75页 |
| 1.6 Western Blot | 第75页 |
| 1.7 间接免疫荧光试验(IFA) | 第75页 |
| 1.8 病毒生长曲线 | 第75-76页 |
| 1.9 病毒蚀斑试验 | 第76页 |
| 1.10 病毒稳定性鉴定 | 第76页 |
| 2 结果 | 第76-80页 |
| 2.1 质粒构建和病毒拯救 | 第76-77页 |
| 2.1.1 pCMV rNJ08/Cap | 第76页 |
| 2.1.2 病毒拯救 | 第76-77页 |
| 2.2 拯救病毒分子遗传标记鉴定 | 第77页 |
| 2.3 Western Blot | 第77-78页 |
| 2.4 间接免疫荧光试验(IFA) | 第78页 |
| 2.5 病毒生长曲线 | 第78-79页 |
| 2.6 病毒蚀斑试验 | 第79页 |
| 2.7 病毒稳定性鉴定 | 第79-80页 |
| 3 讨论 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-86页 |
| 全文总结 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88-90页 |
| 在读期间发表论文 | 第90页 |
