| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 1 引言 | 第13-22页 |
| 1.1 棉花角斑病菌的研究现状 | 第13页 |
| 1.2 Harpin蛋白的基本特征 | 第13-18页 |
| 1.2.1 Harpin蛋白的分类 | 第14-15页 |
| 1.2.2 Harpin蛋白的理化性质 | 第15页 |
| 1.2.3 Harpin在植物细胞中的定位 | 第15-16页 |
| 1.2.4 Harpin蛋白激发的信号途径 | 第16-17页 |
| 1.2.5 HpaXm蛋白的研究现状 | 第17-18页 |
| 1.3 细菌的遗传转化方法 | 第18-19页 |
| 1.4 黄单胞菌的限制修饰系统的驯化 | 第19-21页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第21页 |
| 1.6 技术路线 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-35页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第22页 |
| 2.1.2 试剂、试剂盒和仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要溶液及培养基的配置 | 第23-25页 |
| 2.1.4 试验所用引物及条件 | 第25页 |
| 2.2 试验方法 | 第25-35页 |
| 2.2.1 细菌基因组DNA的提取方法 | 第25-26页 |
| 2.2.2 质粒的提取方法 | 第26-27页 |
| 2.2.3 PCR扩增 | 第27-29页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第29页 |
| 2.2.5 琼脂糖凝胶DNA片段切胶回收 | 第29页 |
| 2.2.6 PCR扩增产物DNA片段的纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.7 酶切反应 | 第30页 |
| 2.2.8 载体和DNA的T4 DNA Ligase酶连接 | 第30-31页 |
| 2.2.9 大肠杆菌的热击转化及蓝白斑筛选 | 第31页 |
| 2.2.10 V8菌株电转化感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2.2.11 V8菌株的电转化方法 | 第31-32页 |
| 2.2.12 V8菌株CFEs的提取 | 第32页 |
| 2.2.13 CFEs体外甲基化敲除载体 | 第32页 |
| 2.2.14 V8菌株的驯化 | 第32-33页 |
| 2.2.15 突变菌株生物学特性的研究 | 第33-34页 |
| 2.2.16 突变菌株的烟草过敏反应 | 第34页 |
| 2.2.17 不同条件对V8菌株电转化效率的影响 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-51页 |
| 3.1 敲除载体pK18mobsacB::N1012和pK18mobsacB::m762构建成功 | 第35-38页 |
| 3.1.1 融合片段hpaXm-IP-(L+R)和hpaXm-(L+R)的获得 | 第35-36页 |
| 3.1.2 重组质粒阳性克隆的PCR验证 | 第36页 |
| 3.1.3 重组质粒的双酶切和测序验证 | 第36-38页 |
| 3.2 驯化方式的有效性 | 第38-41页 |
| 3.2.1 无细胞胞外物驯化重组质粒 | 第38-39页 |
| 3.2.2 去甲基化氮胞苷驯化菌株V8 | 第39-40页 |
| 3.2.3 重组质粒和V8菌株双重驯化 | 第40页 |
| 3.2.4 两种驯化方式对V8菌株电转化效率的差异 | 第40-41页 |
| 3.3 V8ΔhpaXm-IP和V8ΔhpaXm突变菌株的获得 | 第41-44页 |
| 3.3.1 突变菌株菌株单交换转化子的验证 | 第41-42页 |
| 3.3.2 突变菌株双交换转化子的验证 | 第42-44页 |
| 3.4 V8菌株最优电转化条件的摸索 | 第44-48页 |
| 3.4.1 细菌生长状态对V8菌株电转化效率的影响 | 第44页 |
| 3.4.2 电场强度对V8菌株电转化效率的影响 | 第44-45页 |
| 3.4.3 质粒浓度对V8菌株电转化效率的影响 | 第45页 |
| 3.4.4 质粒用量对V8菌株电转化效率的影响 | 第45-46页 |
| 3.4.5 复苏培养基种类对V8菌株电转化效率的影响 | 第46页 |
| 3.4.6 复苏培养基温度对V8菌株电转化效率的影响 | 第46-47页 |
| 3.4.7 复苏方式对V8菌株电转化效率的影响 | 第47页 |
| 3.4.8 复苏时间对V8菌株电转化效率的影响 | 第47-48页 |
| 3.5 突变菌株表型及HR测定 | 第48-51页 |
| 3.5.1 突变菌株部分生物学特性测定 | 第48-50页 |
| 3.5.2 突变菌株生长能力的检测 | 第50-51页 |
| 3.5.3 突变菌株对烟草的HR测定 | 第51页 |
| 4 讨论 | 第51-56页 |
| 4.1 重组质粒的构建 | 第51-52页 |
| 4.2 棉花角斑病菌遗传驯化体系的建立 | 第52-53页 |
| 4.3 V8菌株最适电转化条件的摸索 | 第53页 |
| 4.4 突变菌株的表型和HR变化 | 第53-56页 |
| 5 结论 | 第56-58页 |
| 5.1 建立V8菌株的遗传驯化体系 | 第56页 |
| 5.2 V8菌株的最优电转化条件 | 第56-57页 |
| 5.3 突变菌株表型及对烟草HR变化 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-69页 |
| 附录 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
