| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第14-21页 |
| 1.1 乳腺癌的分类 | 第14-15页 |
| 1.2 乳腺癌的诊断现状 | 第15页 |
| 1.3 非编码RNA | 第15-18页 |
| 1.3.1 miRNA的生物学功能 | 第16页 |
| 1.3.2 miRNAs与乳腺癌 | 第16-17页 |
| 1.3.3 血液中miRNA与乳腺癌 | 第17-18页 |
| 1.4 研究目的、内容、方法、实验设计方案和意义 | 第18-21页 |
| 1.4.1 研究目的 | 第18-19页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第19页 |
| 1.4.3 研究方法 | 第19页 |
| 1.4.4 实验设计方案 | 第19-20页 |
| 1.4.5 研究意义 | 第20-21页 |
| 第二章 循环MIR-188-5P在乳腺癌中临床意义及诊断作用分析 | 第21-33页 |
| 2.1 材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 研究对象 | 第21页 |
| 2.1.2 主要器材及耗材 | 第21-22页 |
| 2.1.3 试剂 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-25页 |
| 2.2.1 Cel-miR-39-3p标准品的配制 | 第22-23页 |
| 2.2.2 血清miRNA的提取 | 第23页 |
| 2.2.3 miRNA的逆转录 | 第23-24页 |
| 2.2.4 qRT-PCR测定miRNA | 第24-25页 |
| 2.2.5 血清CEA和CA153的测定 | 第25页 |
| 2.2.6 统计学方法 | 第25页 |
| 2.3 实验结果 | 第25-31页 |
| 2.3.1 miR-188-5p、CEA和CA153在健康人、乳腺纤维腺瘤患者术前和乳腺癌患者术前血清中的表达情况 | 第25-27页 |
| 2.3.2 ROC曲线分析血清miRNA-188-5p在乳腺癌诊断中作用 | 第27-28页 |
| 2.3.3 血清miRNA-188-5p在乳腺纤维腺瘤与乳腺癌组手术前后表达情况 | 第28-29页 |
| 2.3.4 血清miR-188-5p与临床病理资料的相关性 | 第29-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 MIR-188-5P在乳腺癌细胞中功能分析 | 第33-43页 |
| 3.1 材料 | 第33-34页 |
| 3.1.1 主要器材及耗材 | 第33页 |
| 3.1.2 试剂 | 第33-34页 |
| 3.1.3 细胞株 | 第34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-37页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第34页 |
| 3.2.2 寡核苷酸片段配置 | 第34-35页 |
| 3.2.3 细胞转染 | 第35页 |
| 3.2.4 细胞总RNA提取 | 第35-36页 |
| 3.2.5 miRNA的逆转录 | 第36页 |
| 3.2.6 qRT-PCR测定miRNA | 第36页 |
| 3.2.7 Transwell迁移实验 | 第36页 |
| 3.2.8 平板克隆形成实验 | 第36页 |
| 3.2.9 细胞外泌体exosome提取 | 第36-37页 |
| 3.2.10 exosome中miRNA的提取方法 | 第37页 |
| 3.2.11 exosome中miRNA逆转录 | 第37页 |
| 3.2.12 qRT-PCR检测exosome中miRNA | 第37页 |
| 3.2.13 统计学分析 | 第37页 |
| 3.3 实验结果 | 第37-40页 |
| 3.3.1 miR-188-5p在乳腺癌细胞中表达情况 | 第37-38页 |
| 3.3.2 过表达miR-188-5p可抑制MDA-MB-231增殖与迁移 | 第38页 |
| 3.3.3 敲减miR-188-5p可显著增强乳腺癌细胞MCF-7增殖和迁移能力 | 第38-39页 |
| 3.3.4 乳腺癌细胞外泌体exosome中miR-188-5p检测分析 | 第39-40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-43页 |
| 第四章 IL6ST是MIR-188-5P调控靶基因 | 第43-56页 |
| 4.1 材料 | 第43-44页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第43-44页 |
| 4.1.2 主要仪器及相关耗材 | 第44页 |
| 4.1.3 细胞株 | 第44页 |
| 4.1.4 组织切片 | 第44页 |
| 4.2 方法 | 第44-51页 |
| 4.2.1 靶基因预测 | 第44页 |
| 4.2.2 靶基因mRNA3’UTR荧光素酶报告基因载体构建 | 第44-47页 |
| 4.2.3 报告基因载体转染 | 第47页 |
| 4.2.4 报告基因检测 | 第47页 |
| 4.2.5 IL6ST引物配制 | 第47-48页 |
| 4.2.6 细胞总RNA的提取 | 第48页 |
| 4.2.7 mRNA逆转录 | 第48-49页 |
| 4.2.8 mRNAqRT-PCR检测 | 第49页 |
| 4.2.9 细胞总蛋白提取 | 第49页 |
| 4.2.10 Westernblot | 第49-50页 |
| 4.2.11 免疫组织化学 | 第50页 |
| 4.2.12 统计学分析 | 第50-51页 |
| 4.3 实验结果 | 第51-54页 |
| 4.3.1 miR-188-5p通过mRNA3’UTR结合位点调控IL6ST | 第51-52页 |
| 4.3.2 qRT-PCR检测乳腺癌细胞中IL6STmRNA的表达 | 第52页 |
| 4.3.3 Westernblot检测乳腺癌细胞中IL6ST蛋白的表达 | 第52-53页 |
| 4.3.4 免疫组化检测乳腺癌标本中IL6ST的表达 | 第53-54页 |
| 4.4 讨论 | 第54-56页 |
| 结论与展望 | 第56-57页 |
| 结论 | 第56页 |
| 展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第65页 |
