| 摘要 | 第4-7页 |
| abstract | 第7-10页 |
| 前言 | 第13-19页 |
| 第一章 单个T淋巴细胞分离工具的制备及单细胞水平的RT-PCR扩增 | 第19-33页 |
| 引言 | 第19页 |
| 1.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 1.1.1 实验样本 | 第19页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第19-20页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第20-21页 |
| 1.2 实验方法 | 第21-28页 |
| 1.2.1 单个T淋巴细胞分离工具的制备 | 第21页 |
| 1.2.2 PBMC的分离 | 第21-22页 |
| 1.2.3 CD8~+T细胞的分选 | 第22页 |
| 1.2.4 单个CD8~+T细胞的分离 | 第22-23页 |
| 1.2.5 单个CD8~+T细胞GAPDH基因扩增条件的摸索 | 第23-27页 |
| 1.2.6 单个CD8~+T细胞的BCL2、STAT1和CD8a基因的扩增 | 第27-28页 |
| 1.3 结果 | 第28-31页 |
| 1.3.1 CD8~+T细胞的分选 | 第28页 |
| 1.3.2 单个CD8~+T细胞的分离 | 第28-29页 |
| 1.3.3 单个CD8~+T细胞GAPDH基因的扩增结果 | 第29-30页 |
| 1.3.4 BCL2、STAT1和CD8a基因的扩增结果 | 第30-31页 |
| 1.4 本章讨论 | 第31-32页 |
| 1.5 本章小结 | 第32-33页 |
| 第二章 建立单个T细胞TCRA基因的扩增方法 | 第33-58页 |
| 引言 | 第33-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-35页 |
| 2.1.1 实验样本 | 第34页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第34-35页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-43页 |
| 2.2.1 外周血的分离和抗体的过滤 | 第35-36页 |
| 2.2.2 识别特定抗原表位肽的CD8~+T细胞的富集 | 第36页 |
| 2.2.3 单个识别特定抗原表位肽的CD8~+T细胞的分离 | 第36页 |
| 2.2.4 GAPDH、CD8a基因的扩增验证 | 第36页 |
| 2.2.5 单个CD8~+T细胞TCRA基因的5’RACE法扩增 | 第36-39页 |
| 2.2.6 单个CD8~+T细胞TCRA基因的分步多重PCR法扩增 | 第39-43页 |
| 2.3 结果 | 第43-55页 |
| 2.3.1 识别特定抗原表位肽的CD8~+T细胞的富集 | 第43页 |
| 2.3.2 单细胞GAPDH、CD8a基因的扩增验证 | 第43-44页 |
| 2.3.3 单个CD8~+T细胞TCRA基因的5’RACE法扩增结果 | 第44-47页 |
| 2.3.4 单个CD8~+T细胞TCRA基因的分步多重PCR法扩增结果 | 第47-55页 |
| 2.4 本章讨论 | 第55-57页 |
| 2.5 本章小结 | 第57-58页 |
| 第三章 TCR(α和β链)重组表达载体的构建 | 第58-75页 |
| 引言 | 第58页 |
| 3.1 实验材料 | 第58-59页 |
| 3.1.1 实验样本 | 第58页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第58-59页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第59页 |
| 3.2 实验方法 | 第59-68页 |
| 3.2.1 TCRα和β全长序列拼接及引物设计 | 第59-60页 |
| 3.2.2 TCRα和β的片段1和片段3的扩增 | 第60-61页 |
| 3.2.3 TCRα和β的全长扩增 | 第61-62页 |
| 3.2.4 T-A克隆、测序 | 第62-64页 |
| 3.2.5 TCR重组表达载体的构建流程 | 第64页 |
| 3.2.6 TCRα和β的引物设计 | 第64-65页 |
| 3.2.7 插入片段的制备 | 第65页 |
| 3.2.8 pIRES2-TCRα载体的构建 | 第65-66页 |
| 3.2.9 pIRES2-TCRβ-TCRα载体的构建 | 第66-67页 |
| 3.2.10 质粒的提取 | 第67-68页 |
| 3.3 结果 | 第68-73页 |
| 3.3.1 TCRα和β全长序列拼接 | 第68-69页 |
| 3.3.2 TCRα和β的全长扩增结果 | 第69-70页 |
| 3.3.3 TCR重组表达载体的构建结果 | 第70-73页 |
| 3.4 本章讨论 | 第73-74页 |
| 3.5 本章小结 | 第74-75页 |
| 第四章 总结与展望 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-82页 |
| 附录一 英文缩略词表 | 第82-83页 |
| 附录二 质粒图谱 | 第83-85页 |
| 附录三 攻读学位期间发表的论文 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
