| 中文摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 综述 | 第12-22页 |
| 1 引言 | 第12-13页 |
| 2 HKT转运蛋白的研究 | 第13-17页 |
| 2.1 水稻HKT转运蛋白 | 第15-17页 |
| 2.1.1 水稻OsHKT2;4转运蛋白 | 第16-17页 |
| 3 Mg~(2+)的生理功能 | 第17页 |
| 4 Mg~(2+)转运蛋白的研究 | 第17-19页 |
| 4.1 拟南芥中镁离子转运蛋白的研究 | 第18-19页 |
| 5 本课题的立题依据及意义 | 第19-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-44页 |
| 1 实验材料 | 第22-27页 |
| 1.1 实验材料及仪器 | 第22-23页 |
| 1.2 试剂和培养基的配制 | 第23-26页 |
| 1.2.1 常用分子试剂及试剂盒 | 第23页 |
| 1.2.2 培养基类药品 | 第23页 |
| 1.2.3 培养基的配制 | 第23-26页 |
| 1.3 菌株和质粒 | 第26页 |
| 1.3.1 菌株 | 第26页 |
| 1.3.2 质粒 | 第26页 |
| 1.4 生物信息学分析常用的软件和数据库网站 | 第26-27页 |
| 2 实验方法 | 第27-44页 |
| 2.1 植株培养 | 第27-28页 |
| 2.1.1 拟南芥的培养 | 第27页 |
| 2.1.2 水稻的培养 | 第27-28页 |
| 2.2 菌株培养 | 第28页 |
| 2.3 爪蟾培养 | 第28-33页 |
| 2.3.1 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| 2.3.2 获取目的基因 | 第29-31页 |
| 2.3.3 酶切 | 第31页 |
| 2.3.4 连接 | 第31-32页 |
| 2.3.5 转化 | 第32页 |
| 2.3.6 菌检 | 第32页 |
| 2.3.7 抽提质粒 | 第32-33页 |
| 2.4 MM281功能互补实验 | 第33-35页 |
| 2.4.1 pTrc99A-OsHKT2;4表达载体的构建 | 第33-34页 |
| 2.4.2 pTrc99A-OsHKT2;4重组载体转化MM281细胞 | 第34-35页 |
| 2.5 拟南芥纯合突变体的鉴定 | 第35-38页 |
| 2.5.1 DNA水平的初步鉴定 | 第36-37页 |
| 2.5.2 转录水平的进一步鉴定 | 第37-38页 |
| 2.6 构建pCAMBIA 1300-OsHKT2; 4过表达植株 | 第38-40页 |
| 2.6.1 重组质粒的构建 | 第38-39页 |
| 2.6.2 农杆菌介导的转基因法 | 第39-40页 |
| 2.6.3 转基因植株的筛选 | 第40页 |
| 2.7 非洲爪膽卵母细胞双电极电压钳实验 | 第40-42页 |
| 2.7.1 pGEMHE-OsHKT2;4表达载体的构建 | 第41页 |
| 2.7.2 体外合成Capping RNA | 第41-42页 |
| 2.7.3 获取非洲爪膽卵母细胞 | 第42页 |
| 2.7.4 cRNA的显微注射 | 第42页 |
| 2.7.5 双电极电压钳记录信号 | 第42页 |
| 2.8 过表达植株Mg~(2+)含量测定 | 第42-44页 |
| 2.8.1 拟南芥种子种植和培养 | 第42-43页 |
| 2.8.2 获取样品 | 第43-44页 |
| 第三章 结果与分析 | 第44-60页 |
| 1 OsHKT2;4能够回补MM281在低Mg~(2+)培养基中的生长 | 第44-46页 |
| 1.1 pTrc99A-OsHKT2;4表达载体的构建 | 第44页 |
| 1.2 MM281功能互补实验 | 第44-45页 |
| 1.3 液体生长曲线实验 | 第45-46页 |
| 2 OsHKT2;4过表达体不能回补突变体atmgt6低镁生长缺陷的表型 | 第46-52页 |
| 2.1 突变体atmgt6纯合鉴定 | 第47-48页 |
| 2.1.1 DNA水平的初步鉴定 | 第47-48页 |
| 2.1.2 转录水平的鉴定(RT-PCR) | 第48页 |
| 2.2 pCAMBIA1 300-OsHKT2;4过表达植株的构建 | 第48-50页 |
| 2.2.1 表达载体的构建 | 第49页 |
| 2.2.2 转录水平的筛选 | 第49-50页 |
| 2.2.3 抗性筛选 | 第50页 |
| 2.3 过表达植株的低镁表型分析 | 第50-52页 |
| 3 双电极电压钳生理数据表明高Mg~(2+)条件下OsHKT2;4产生Mg~(2+)依赖的内向电流 | 第52-53页 |
| 3.1 pEGMHE-OsHKT2;4重组载体构建 | 第52-53页 |
| 3.2 OsHKT2;4在高镁条件下产生Mg~(2+)依赖的内向电流 | 第53页 |
| 4 OsHKT2;4过表达体对高浓度Mg~(2+)敏感 | 第53-56页 |
| 4.1 过表达植株的高镁表型分析 | 第54-55页 |
| 4.2 不同Mg~(2+)浓度处理下过表达植株Mg~(2+)含量的测定 | 第55-56页 |
| 5 Ca~(2+)能缓解高镁毒害 | 第56-60页 |
| 第四章 讨论 | 第60-64页 |
| 1 在植物体高Mg~(2+)条件下OsHKT2;4能够转运Mg~(2+) | 第60-61页 |
| 2 OsHKT2;4过表达体改变了植物体内的Ca~(2+)/Mg~(2+)稳态 | 第61页 |
| 3 Mg~(2+)毒害的潜在机制 | 第61-62页 |
| 4 展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 攻读硕士学位期间论文（待）发表情况 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72-74页 |
| 附录A | 第74-75页 |
| 附录B | 第75-76页 |
