| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第10-21页 |
| 1.1 课题背景及研究的目的和意义 | 第10页 |
| 1.2 腺病毒的一般生物学特性 | 第10-12页 |
| 1.3 腺病毒载体研发现状 | 第12-20页 |
| 1.3.1 腺病毒载体构建的一般原理 | 第13-14页 |
| 1.3.2 腺病毒载体的构建 | 第14-18页 |
| 1.3.3 腺病毒载体的应用现状 | 第18-19页 |
| 1.3.4 存在问题与展望 | 第19-20页 |
| 1.4 本文的主要研究内容 | 第20-21页 |
| 第2章 材料与方法 | 第21-39页 |
| 2.1 材料 | 第21-27页 |
| 2.1.1 质粒和细胞 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 细胞传代消化液 | 第22页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.5 试剂配制 | 第23-27页 |
| 2.2 方法 | 第27-38页 |
| 2.2.1 人源性凝血因子FVIII的RNA提取 | 第27页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| 2.2.3 细菌质粒DNA转化实验 | 第28-29页 |
| 2.2.4 碱裂解法质粒提取 | 第29页 |
| 2.2.5 反转录法合成总c DNA | 第29-30页 |
| 2.2.6 基因的体外连接 | 第30页 |
| 2.2.7 限制性内切酶分析法 | 第30-31页 |
| 2.2.8 PCR法扩增获得h F cⅧDNA | 第31页 |
| 2.2.9 h FⅧ基因的纯化 | 第31-32页 |
| 2.2.10 h F Ⅷ 基因的克隆与扩增 | 第32页 |
| 2.2.11 h F Ⅷ 基因序列测定及分析 | 第32-33页 |
| 2.2.12 含有h FⅧ基因Adv5 载体的制备 | 第33-35页 |
| 2.2.13 细胞的培养与冻存 | 第35页 |
| 2.2.14 Western blotting 分析 | 第35-38页 |
| 2.3 本章小结 | 第38-39页 |
| 第3章 重组人凝血因子Ⅷ基因的克隆与鉴定 | 第39-48页 |
| 3.1 引言 | 第39页 |
| 3.2 编码人凝血因子蛋白的DNA分子克隆实验 | 第39-41页 |
| 3.2.1 细胞总RNA的提取 | 第39-40页 |
| 3.2.2 特异性PCR扩增凝血因子DNA片段 | 第40-41页 |
| 3.3 编码人凝血因子蛋白的DNA序列分析 | 第41-46页 |
| 3.4 本章小结 | 第46-48页 |
| 第4章 重组人凝血因子Ⅷ腺病毒载体的构建 | 第48-59页 |
| 4.1 引言 | 第48页 |
| 4.2 含有h FⅧ基因的穿梭载体的构建结果与分析 | 第48-50页 |
| 4.2.1 构建含有GFP的Adv穿梭载体 | 第48-49页 |
| 4.2.2 含有FⅧ基因的Adv穿梭载体的构建 | 第49-50页 |
| 4.3 含有h FⅧ基因的Ad5 型载体构建 | 第50-51页 |
| 4.4 p Ad- hFⅧ载体鉴定与扩增结果 | 第51-58页 |
| 4.4.1 脂质体法转染HEK 293 细胞 | 第51-53页 |
| 4.4.2 荧光法测定重组腺病毒Ad-VIII的滴度 | 第53-54页 |
| 4.4.3 重组病毒Ad-h FVIII的PCR鉴定 | 第54-57页 |
| 4.4.4 免疫杂技术鉴定重组Adv表达h FⅧ的效果 | 第57-58页 |
| 4.5 本章小结 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 攻读硕士学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68页 |
