| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 绪论 | 第10-15页 |
| 1.1 沉香的价值 | 第10页 |
| 1.2 白木香的分布及现状 | 第10页 |
| 1.3 白木香的主要化学成分研究 | 第10-11页 |
| 1.3.1 倍半萜成分 | 第10-11页 |
| 1.3.2 化学成分 | 第11页 |
| 1.4 白木香结香机理的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.5 MAPK研究进展 | 第12-13页 |
| 1.5.1 植物中MAPK信号通路的组成情况 | 第12页 |
| 1.5.2 植物中MAPK信号通路的功能 | 第12-13页 |
| 1.5.3 MAPK信号通路的研究现状 | 第13页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第13页 |
| 1.7 主要内容 | 第13-15页 |
| 2 AsMAPK3基因的克隆及生物信息学分析 | 第15-27页 |
| 2.1 引言 | 第15页 |
| 2.2 实验仪器及材料 | 第15-16页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第15页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第15页 |
| 2.2.3 菌种和质粒 | 第15页 |
| 2.2.4 植物材料 | 第15-16页 |
| 2.2.5 实验所用引物的设计与合成 | 第16页 |
| 2.3 实验方法 | 第16-21页 |
| 2.3.1 总RNA的提取及检测 | 第16页 |
| 2.3.2 mRNA的分离与纯化 | 第16-17页 |
| 2.3.3 5'和3'cDNA第一链的合成 | 第17-18页 |
| 2.3.3.1 5'cDNA第一链的合成 | 第17页 |
| 2.3.3.2 3'cDNA第一链的合成 | 第17-18页 |
| 2.3.4 cDNA链的合成 | 第18页 |
| 2.3.5 白木香AsMAPK3基因的克隆 | 第18-20页 |
| 2.3.5.1 5'和3'cDNA的扩增 | 第18-19页 |
| 2.3.5.2 PCR产物检测与回收 | 第19页 |
| 2.3.5.3 连接、转化与测序 | 第19-20页 |
| 2.3.6 生物信息学分析及进化树的构建 | 第20-21页 |
| 2.4 结果与分析 | 第21-26页 |
| 2.4.1 总RNA的提取 | 第21页 |
| 2.4.2 AsMAPK3基因的3'、5'-RACE及全长cDNA的克隆 | 第21-22页 |
| 2.4.3 白木香AsMAPK3基因cDNA序列分析及相关生物信息学分析 | 第22-26页 |
| 2.4.3.1 基因理化性质 | 第22-23页 |
| 2.4.3.2 氨基酸序列的系统进化树构建 | 第23页 |
| 2.4.3.3 疏水性/亲水性的预测和分析 | 第23-24页 |
| 2.4.3.4 跨膜结构域的预测与分析 | 第24页 |
| 2.4.3.5 二级结构的预测与分析 | 第24-25页 |
| 2.4.3.6 三级结构的预测与分析 | 第25页 |
| 2.4.3.7 亚细胞定位预测 | 第25-26页 |
| 2.5 本章小结 | 第26-27页 |
| 3 AsMAPK3的组织表达及诱导分析 | 第27-32页 |
| 3.1 引言 | 第27页 |
| 3.2 实验仪器与材料 | 第27-28页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第27页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第27页 |
| 3.2.3 植物材料 | 第27页 |
| 3.2.4 引物设计 | 第27-28页 |
| 3.3 实验方法 | 第28-29页 |
| 3.3.1 总RNA的提取和cDNA的合成 | 第28页 |
| 3.3.2 实时荧光定量PCR引物的特异性检测 | 第28页 |
| 3.3.3 Real-time qRT-PCR扩增 | 第28-29页 |
| 3.3.4 qRT-PCR的数据处理 | 第29页 |
| 3.4 结果与分析 | 第29-31页 |
| 3.4.1 AsMAPK3基因在组织中的表达情况 | 第29页 |
| 3.4.2 AsMAPK3基因在伤害胁迫下的表达分析 | 第29-31页 |
| 3.4.2.1 AsMAPK3基因在水杨酸伤害胁迫下的表达分析 | 第29-30页 |
| 3.4.2.2 AsMAPK3基因在茉莉酸甲酯胁迫下的表达分析 | 第30-31页 |
| 3.5 本章小结 | 第31-32页 |
| 4 AsMAPK3基因的亚细胞定位 | 第32-37页 |
| 4.1 引言 | 第32页 |
| 4.2 实验材料 | 第32页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第32页 |
| 4.2.2 酶及主要分子生物学和生物化学试剂 | 第32页 |
| 4.2.3 菌株和质粒载体 | 第32页 |
| 4.3 实验方法 | 第32-35页 |
| 4.3.1 瞬时表达载体AsMAPK3~L-GFP的构建 | 第32-34页 |
| 4.3.1.1 AsMAPK3~L开放阅读框序列的引物设计 | 第32-33页 |
| 4.3.1.2 AsMAPK3~L基因序列的扩增 | 第33页 |
| 4.3.1.3 GFP-Vector和PCR产物的酶切 | 第33-34页 |
| 4.3.2 基因枪法转化基因到洋葱表皮细胞 | 第34-35页 |
| 4.3.2.1 洋葱的准备 | 第34页 |
| 4.3.2.2 金粉悬液的准备 | 第34页 |
| 4.3.2.3 金粉-DNA复合体的制备 | 第34-35页 |
| 4.3.3 基因枪法转化AsMAPK3~L-GFP瞬时表达载体 | 第35页 |
| 4.4 实验结果 | 第35-36页 |
| 4.4.1 瞬时表达载体AsMAPK3~L-GFP的构建 | 第35-36页 |
| 4.4.2 AsMAPK3~L-GFP在洋葱表皮细胞的亚细胞定位结果 | 第36页 |
| 4.5 本章小结 | 第36-37页 |
| 5 AsMAPK3基因原核表达 | 第37-45页 |
| 5.1 引言 | 第37页 |
| 5.2 实验仪器与材料 | 第37页 |
| 5.2.1 实验仪器 | 第37页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第37页 |
| 5.2.3 菌种与载体 | 第37页 |
| 5.3 实验方法 | 第37-42页 |
| 5.3.1 白木香AsMAPK3基因原核表达载体的构建 | 第37-40页 |
| 5.3.1.1 引物的设计 | 第37-38页 |
| 5.3.1.2 完整AsMAPK3基因的扩增 | 第38页 |
| 5.3.1.3 提取AsMAPK3-T和PET-28a质粒 | 第38页 |
| 5.3.1.4 AsMAPK3-T和PET-28a载体的双酶切 | 第38-39页 |
| 5.3.1.5 基因片段与PET-28a载体的连接转化 | 第39-40页 |
| 5.3.1.6 重组质粒PET-28a-AsMAPK3酶切 | 第40页 |
| 5.3.1.7 重组质粒PET-28a-AsMAPK3的提取 | 第40页 |
| 5.3.2 融合蛋白的原核诱导表达 | 第40-42页 |
| 5.3.2.1 重组载体的蛋白表达 | 第40页 |
| 5.3.2.2 聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)检测 | 第40-41页 |
| 5.3.2.3 原核表达条件优化 | 第41页 |
| 5.3.2.4 蛋白纯化 | 第41-42页 |
| 5.4 实验结果 | 第42-44页 |
| 5.4.1 原核表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 5.4.2 诱导表达 | 第43-44页 |
| 5.5 本章小结 | 第44-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
