| 摘要 | 第2-3页 |
| abstract | 第3-4页 |
| 引言 | 第7-8页 |
| 第一章 山东地区先天性甲状腺功能减退症伴甲状腺发育异常患儿NNT基因突变筛查研究 | 第8-16页 |
| 1.1 研究对象 | 第8页 |
| 1.2 实验材料 | 第8-9页 |
| 1.2.1 主要实验仪器 | 第8页 |
| 1.2.2 主要实验试剂 | 第8-9页 |
| 1.2.3 主要实验耗材 | 第9页 |
| 1.2.4 主要实验用软件 | 第9页 |
| 1.3 实验方法 | 第9-11页 |
| 1.3.1 基因提取 | 第9页 |
| 1.3.2 DNA质量检测 | 第9-10页 |
| 1.3.3 设计PCR扩增引物 | 第10-11页 |
| 1.3.4 PCR扩增NNT基因21个编码区(NM_012343.3) | 第11页 |
| 1.3.5 电泳检测PCR产物质量并测序 | 第11页 |
| 1.3.6 测序结果生物信息学处理 | 第11页 |
| 1.4 实验结果 | 第11-14页 |
| 1.4.1 琼脂糖凝胶电泳 | 第11-12页 |
| 1.4.2 Sanger测序结果 | 第12页 |
| 1.4.3 同源性比较 | 第12-13页 |
| 1.4.4 蛋白危害性预测 | 第13-14页 |
| 1.5 讨论 | 第14-15页 |
| 1.6 结论 | 第15-16页 |
| 第二章 所发现NNT基因突变的功能研究 | 第16-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-19页 |
| 2.1.1 主要实验仪器 | 第16页 |
| 2.1.2 主要实验试剂 | 第16-19页 |
| 2.1.3 主要实验耗材 | 第19页 |
| 2.1.4 主要分析用软件 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-23页 |
| 2.2.1 野生型真核表达载体构建 | 第19页 |
| 2.2.2 突变型真核表达载体构建 | 第19-20页 |
| 2.2.3 真核表达载体转化细菌并扩大培养 | 第20页 |
| 2.2.4 质粒提取,获得大量真核表达载体克隆 | 第20-21页 |
| 2.2.5 Hela细胞复苏、培养及传代 | 第21页 |
| 2.2.6 转染Hela细胞 | 第21页 |
| 2.2.7 蛋白提取 | 第21-22页 |
| 2.2.8 BCA测定蛋白浓度 | 第22页 |
| 2.2.9 Western Blot测定NNT蛋白表达量 | 第22-23页 |
| 2.2.10 过氧化氢测定 | 第23页 |
| 2.2.11 蛋白疏水性分析 | 第23页 |
| 2.3 实验结果 | 第23-26页 |
| 2.3.1 蛋白表达量检测 | 第23-24页 |
| 2.3.2 过氧化氢量的检测 | 第24-25页 |
| 2.3.3 蛋白疏水性分析 | 第25-26页 |
| 2.4 讨论 | 第26-27页 |
| 2.5 结论 | 第27-28页 |
| 参考文献 | 第28-30页 |
| 综述 | 第30-42页 |
| 参考文献 | 第38-42页 |
| 攻读硕士期间研究成果 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
