| 符号说明 | 第5-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第16-36页 |
| 1.1 家蚕神经系统研究进展 | 第16-23页 |
| 1.1.1 家蚕神经系统构造及功能 | 第16-18页 |
| 1.1.2 家蚕神经系统中的信号传递 | 第18-20页 |
| 1.1.2.1 神经递质 | 第18-19页 |
| 1.1.2.2 离子通道 | 第19页 |
| 1.1.2.3 神经肽 | 第19-20页 |
| 1.1.3 家蚕神经发育及调控的研究 | 第20-21页 |
| 1.1.4 家蚕神经的研究方法 | 第21-23页 |
| 1.1.4.1 电生理学方法 | 第22页 |
| 1.1.4.2 免疫细胞化学法 | 第22页 |
| 1.1.4.3 转基因方法 | 第22页 |
| 1.1.4.4 神经相关数据库的建立 | 第22-23页 |
| 1.1.4.5 三维重建 | 第23页 |
| 1.2 神经轴突导向因子Slit的功能及其分子作用机制研究进展 | 第23-33页 |
| 1.2.1 Slit蛋白的结构 | 第24页 |
| 1.2.2 Slit的主要功能 | 第24-28页 |
| 1.2.2.1 对神经轴突生长方向的排斥导向作用 | 第24-26页 |
| 1.2.2.2 控制细胞迁移 | 第26-27页 |
| 1.2.2.3 影响神经细胞的分裂和形态分化 | 第27-28页 |
| 1.2.2.4 对血管和心脏形成的作用 | 第28页 |
| 1.2.3 Slit的分子作用机制 | 第28-32页 |
| 1.2.3.1 Robo受体 | 第28-29页 |
| 1.2.3.2 硫酸肝素蛋白多糖 | 第29-30页 |
| 1.2.3.3 GTP酶激活蛋白 | 第30-31页 |
| 1.2.3.4 酪氨酸激酶 | 第31页 |
| 1.2.3.5 细胞内钙离子 | 第31页 |
| 1.2.3.6 Netrin、Semaphorin、Ephrin信号 | 第31-32页 |
| 1.2.3.7 MicroRNA-218对Slit功能的影响 | 第32页 |
| 1.2.4 slit基因的表达调控研究 | 第32-33页 |
| 1.2.4.1 转录水平调控 | 第32页 |
| 1.2.4.2 转录后水平调控 | 第32-33页 |
| 1.3 蛋白质共进化的研究方法 | 第33-34页 |
| 1.3.1 系统发生谱的相似性 | 第33-34页 |
| 1.3.2 进化树的相似性 | 第34页 |
| 1.3.3 氨基酸水平的共进化 | 第34页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第34-36页 |
| 2 材料与方法 | 第36-59页 |
| 2.1 材料 | 第36-43页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第36页 |
| 2.1.2 质粒和菌株 | 第36页 |
| 2.1.3 生化试剂 | 第36-41页 |
| 2.1.3.1 试剂及试剂盒 | 第36-38页 |
| 2.1.3.2 主要试剂的配制 | 第38-41页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第41页 |
| 2.1.5 主要软件和数据库 | 第41-42页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第42-43页 |
| 2.2 方法 | 第43-59页 |
| 2.2.1 Bmslit基因的克隆 | 第43-48页 |
| 2.2.1.1 Bmslit基因的鉴定 | 第43页 |
| 2.2.1.2 家蚕总RNA的提取 | 第43-44页 |
| 2.2.1.3 cDNA第一链的合成 | 第44-45页 |
| 2.2.1.4 PCR和RACE | 第45-46页 |
| 2.2.1.5 DNA片段的琼脂糖凝胶回收 | 第46页 |
| 2.2.1.6 连接反应 | 第46页 |
| 2.2.1.7 连接产物的转化 | 第46-47页 |
| 2.2.1.8 重组质粒的筛选与测序 | 第47页 |
| 2.2.1.9 质粒提取 | 第47-48页 |
| 2.2.2 小鼠抗BmSlit多克隆抗体的制备 | 第48-54页 |
| 2.2.2.1 抗原片段的选择与PCR扩增 | 第48页 |
| 2.2.2.2 原核表达载体的构建 | 第48-50页 |
| 2.2.2.3 重组质粒的原核表达 | 第50页 |
| 2.2.2.4 SDS-PAGE电泳 | 第50-51页 |
| 2.2.2.5 重组蛋白的纯化 | 第51-53页 |
| 2.2.2.6 动物免疫 | 第53页 |
| 2.2.2.7 ELISA | 第53页 |
| 2.2.2.8 Western blot | 第53-54页 |
| 2.2.3 BmSlit体内存在形式检测 | 第54页 |
| 2.2.4 抗体染色 | 第54-55页 |
| 2.2.5 Bmslit的RNAi分析 | 第55-57页 |
| 2.2.5.1 Bmslit dsRNA的制备 | 第55-56页 |
| 2.2.5.2 显微注射 | 第56-57页 |
| 2.2.6 序列收集 | 第57页 |
| 2.2.7 多序列比对 | 第57页 |
| 2.2.8 进化树构建 | 第57页 |
| 2.2.9 Slit-Robo相互作用氨基变化分析 | 第57页 |
| 2.2.10 镜像树法(Mirror Tree) | 第57页 |
| 2.2.11 选择压力检测 | 第57-59页 |
| 3 结果与分析 | 第59-83页 |
| 3.1 Bmslit基因的功能研究 | 第59-73页 |
| 3.1.1 Bmslit基因的序列分析 | 第59-65页 |
| 3.1.2 小鼠抗BmSlit多克隆抗体能与抗原发生特异性免疫反应 | 第65-67页 |
| 3.1.2.1 重组质粒的鉴定 | 第65-66页 |
| 3.1.2.2 重组蛋白的原核表达及纯化 | 第66页 |
| 3.1.2.3 小鼠抗BmSlit多克隆抗体效价的检测 | 第66-67页 |
| 3.1.3 BmSlit在体内存在水解片段 | 第67-68页 |
| 3.1.4 BmSlit的组织定位 | 第68-69页 |
| 3.1.5 BmSlit和BmRobo1在轴突、肌肉和丝腺共定位 | 第69-70页 |
| 3.1.6 Bmslit基因的RNAi表型 | 第70-73页 |
| 3.2 Slit的进化机制研究 | 第73-83页 |
| 3.2.1 Slit的系统发生分析 | 第73-74页 |
| 3.2.2 Slit配体与Robo受体共进化的依据 | 第74-83页 |
| 3.2.2.1 Slit配体与Robo受体的相互作用氨基酸之间存在协调变化 | 第74-75页 |
| 3.2.2.2 Slit配体与Robo受体之间存在较高的进化距离相关系数 | 第75-76页 |
| 3.2.2.3 Slit配体与Robo受体在相同物种鉴定到正选择 | 第76-83页 |
| 4 讨论 | 第83-87页 |
| 4.1 BmSlit的功能 | 第83-84页 |
| 4.1.1 BmSlit在神经中的功能 | 第83页 |
| 4.1.2 BmSlit在肌肉中的功能 | 第83-84页 |
| 4.1.3 BmSlit在丝腺中的功能 | 第84页 |
| 4.2 slit基因的进化 | 第84-87页 |
| 4.2.1 slit基因的起源与进化 | 第84页 |
| 4.2.2 Slit配体与Robo受体的共进化 | 第84-87页 |
| 4.2.2.1 相互作用位点的变化与共进化 | 第84-85页 |
| 4.2.2.2 相关分析与共进化 | 第85页 |
| 4.2.2.3 正选择与共进化 | 第85-87页 |
| 5 结论 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-102页 |
| 附录 | 第102-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第117页 |
