| 缩略词表 | 第6-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 前言 | 第13-22页 |
| 参考文献 | 第17-22页 |
| 第一部分 锌指蛋白转录活化因子的制备 | 第22-39页 |
| 引言 | 第22页 |
| 一 材料与仪器 | 第22-23页 |
| 二 实验方法 | 第23-27页 |
| (一) 人工合成锌指蛋白目的基因和靶基因的结构合成 | 第23页 |
| (二) 基因克隆 | 第23-26页 |
| 1. 聚合酶链反应(PCR)实验 | 第23页 |
| 2. PCR产物回收 | 第23-24页 |
| 3. 质粒与合成的锌指蛋白目的DNA片段的连接 | 第24页 |
| 4. 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第24页 |
| 5. 转化与筛选 | 第24-25页 |
| 6. 取PCR阳性的LB菌液进行保菌 | 第25页 |
| 7. 质粒提取：取PCR阳性的LB管进行小质粒提取 | 第25-26页 |
| 8. 酶切鉴定质粒中的插入片断 | 第26页 |
| (三) 将PVAX1-ZFP质粒与PcDNA3.0-P65质粒进行重组构成PVAX1-ZFP-P65质粒 | 第26-27页 |
| 三 实验结果 | 第27-30页 |
| 1 合成锌指蛋白的氨基酸序列 | 第27-28页 |
| 2 合成锌指蛋白的结构组成 | 第28-29页 |
| 3 质粒的酶切电泳图 | 第29-30页 |
| 四 讨论 | 第30-33页 |
| 一 锌指蛋白的转录作用 | 第30-31页 |
| 二 人工合成锌指蛋白转录因子 | 第31-32页 |
| 三 VEGF基因作用 | 第32-33页 |
| 参考文献 | 第33-39页 |
| 第二部分 ZFP-ATF在细胞实验中的研究 | 第39-58页 |
| 引言 | 第39页 |
| 一 实验材料及试剂 | 第39-41页 |
| 二 实验方法 | 第41-45页 |
| 1. Hy926细胞株的培养 | 第41页 |
| 1.1 细胞复苏 | 第41页 |
| 1.2 细胞传代 | 第41页 |
| 2. 质粒转染入Hy926细胞内 | 第41-42页 |
| 3 细胞总RNA提取(TkIzol法) | 第42页 |
| 4 RT-PCR检测VEGF不同剪接体基因的表达 | 第42-44页 |
| 5 细胞内蛋白提取 | 第44页 |
| 6 蛋白浓度测定和Western-Blotting | 第44-45页 |
| 三 实验结果 | 第45-49页 |
| 1 细胞形态 | 第45-46页 |
| 2 R-T PCR结果 | 第46-47页 |
| 3 Western Blot结果 | 第47-49页 |
| 四 讨论 | 第49-53页 |
| 一 VEGF基因的信号传导 | 第49-52页 |
| 二 VEGF基因的不同剪接体的生成及作用 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 第三部分 大鼠肠系膜血管实验 | 第58-75页 |
| 引言 | 第58页 |
| 一 实验材料 | 第58-59页 |
| 二 实验步骤 | 第59-61页 |
| (一) SD大鼠的饲养 | 第59页 |
| (二) 大鼠肠系膜血管增生实验 | 第59-60页 |
| (三) 大鼠肠系膜免疫荧光实验 | 第60-61页 |
| 三 实验结果 | 第61-66页 |
| (一) 肠系膜血管计数 | 第61-64页 |
| (二) 肠系膜免疫荧光实验结果 | 第64-66页 |
| 四 讨论 | 第66-70页 |
| 一 肠系膜血管床的特点 | 第66-67页 |
| 二 血管的渗透性研究 | 第67-69页 |
| 三 ZFP-ATF促进血管稳定性的研究 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 第四部分 在构建小鼠缺血模型后PLGA优化载体以及ZFP-ATF在小鼠下肢缺血中的治疗性血管生成作用及对骨骼肌肌纤维类型研究 | 第75-109页 |
| 引言 | 第75页 |
| 一 实验材料 | 第75-77页 |
| 二 实验方法 | 第77-84页 |
| (一) 小鼠下肢缺血模型建立 | 第77页 |
| (二) PLGA纳米粒子优化载体的构建 | 第77-78页 |
| (三) 实验小鼠的分组及治疗 | 第78页 |
| (四) 小鼠缺血侧肌肉标本的处理 | 第78-82页 |
| 1, 小鼠骨骼肌肌肉重量的检测 | 第78页 |
| 2, Western Blot实验 | 第78-80页 |
| 3, 染色组织学形态观察,免疫组化 | 第80-82页 |
| 4 在注入质粒后的7,14天分别对小鼠缺血下肢进行评分 | 第82页 |
| (五) 骨骼肌肌纤维类型研究 | 第82-84页 |
| 1, 组织RNA提取和Real-time PCR | 第82-84页 |
| 2, 冰冻切片行肌纤维ATP酶染色 | 第84页 |
| 三 实验结果 | 第84-98页 |
| (一) 小鼠缺血模型构建结果 | 第85页 |
| (二) PLGA纳米优化载体的构建 | 第85-87页 |
| (三) 下肢肌肉的重量测量 | 第87-88页 |
| (四) Western Blot实验结果 | 第88-89页 |
| (五) 肌肉组织化学染色 | 第89-94页 |
| (六) 下肢缺血肢体的功能评估 | 第94页 |
| (七) MHC Real-time PCR实验结果 | 第94-96页 |
| (八) 骨骼肌肌纤维ATP酶染色 | 第96-98页 |
| 四 讨论 | 第98-104页 |
| 一 缺血后的血管生成 | 第98-101页 |
| 1.1 缺血后VEGF表达限制性 | 第99页 |
| 1.2 ZFP-ATF在缺血治疗中的优势 | 第99-101页 |
| 二 肌纤维的研究 | 第101-104页 |
| 2.1 骨骼肌肌纤维分类及功能 | 第101-102页 |
| 2.2 缺血后骨骼肌肌纤维转变 | 第102-103页 |
| 2.3 基因治疗后骨骼肌肌纤维的转变 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-109页 |
| 综述 | 第109-122页 |
| 参考文献 | 第115-122页 |
| 个人情况 | 第122-123页 |
| 发表文章 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
