| 缩略语表 | 第1-13页 |
| 中文摘要 | 第13-16页 |
| ABSTRACT | 第16-20页 |
| 前言 | 第20-22页 |
| 文献回顾 | 第22-42页 |
| 正文 | 第42-86页 |
| 第一部分 QKI-5 显性负突变体的构建及改造 | 第42-52页 |
| 引言 | 第42页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第42-44页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43-44页 |
| 2 方法 | 第44-47页 |
| ·PCR 获得目的片段 | 第44页 |
| ·引物设计 | 第44页 |
| ·目的基因片段的获取 | 第44页 |
| ·酶切及目的片段与载体的连接 | 第44页 |
| ·细胞培养 | 第44-45页 |
| ·间接免疫荧光检测Flag-QKIDNM 和Flag-QKIDNM-QNLS 的细胞定位 | 第45页 |
| ·利用荧光报告系统检测QKIDNM 对QKI 的抑制功能 | 第45-47页 |
| ·pGL3-luc 载体的改良 | 第45-46页 |
| ·β-catenin 的3’UTR 报告系统的构建 | 第46页 |
| ·细胞转染 | 第46-47页 |
| ·荧光素酶报告基因表达的检测 | 第47页 |
| 3 结果 | 第47-50页 |
| ·QKI 显性负突变载体的构建 | 第47-49页 |
| ·间接免疫荧光实验检测QKI 显性负突变体的细胞定位 | 第49页 |
| ·双荧光素酶报告系统检测QKI 显性负突变体的抑制效应 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 第二部分 QKI-6 腺病毒的包装 | 第52-60页 |
| 引言 | 第52页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第52-54页 |
| ·实验材料 | 第52-53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·主要仪器 | 第53-54页 |
| 2 方法 | 第54-57页 |
| ·PCR 获得目的片段 | 第54页 |
| ·引物设计 | 第54页 |
| ·目的基因片段的获取 | 第54页 |
| ·酶切及目的片段与载体的连接 | 第54-55页 |
| ·体外重组 | 第55页 |
| ·细胞培养 | 第55页 |
| ·细胞转染 | 第55页 |
| ·免疫印迹检测重组质粒表达情况及重组腺病毒蛋白表达的情况 | 第55-56页 |
| ·细胞总蛋白提取 | 第55页 |
| ·总蛋白SDS-PAGE 分离及电转移 | 第55-56页 |
| ·Western blotting | 第56页 |
| ·病毒包装 | 第56-57页 |
| ·病毒感染效率检测 | 第57页 |
| 3 结果 | 第57-59页 |
| ·腺病毒载体的构建 | 第57-58页 |
| ·腺病毒感染不同细胞的效率 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-60页 |
| 第三部分 RNA结合蛋白QKI对化疗药物诱导的肿瘤细胞凋亡敏感性影响及调控机制研究 | 第60-86页 |
| 引言 | 第60-61页 |
| 实验一 QKI 在化疗药物诱导的肿瘤细胞凋亡模型中的表达变化 | 第61-71页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第61-63页 |
| ·实验材料 | 第61页 |
| ·主要试剂 | 第61-62页 |
| ·主要仪器 | 第62-63页 |
| 2 方法 | 第63-67页 |
| ·细胞培养 | 第63页 |
| ·RT-PCR | 第63-65页 |
| ·细胞总RNA 提取 | 第63-64页 |
| ·反转录 | 第64页 |
| ·PCR | 第64-65页 |
| ·PCR 引物和PCR 反应 | 第64-65页 |
| ·结果分析 | 第65页 |
| ·免疫印迹 | 第65-66页 |
| ·细胞总蛋白提取 | 第65页 |
| ·BCA 法蛋白定量 | 第65-66页 |
| ·总蛋白SDS-PAGE 分离及电转移 | 第66页 |
| ·Western blot | 第66页 |
| ·荧光报告系统 | 第66页 |
| ·QKI 启动子报告系统的构建和检测 | 第66页 |
| ·细胞转染 | 第66页 |
| ·荧光素酶报告基因表达的检测 | 第66页 |
| ·RNA 半衰期检测 | 第66-67页 |
| 3 结果 | 第67-69页 |
| ·化疗药物诱导的肿瘤细胞凋亡过程中QKI 表达降低 | 第67-68页 |
| ·化疗药物诱导的QKI 表达水平的降低发生于转录和转录后水平 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-71页 |
| 实验二 QKI 在化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡过程中的调节作用 | 第71-80页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第71页 |
| 2 方法 | 第71-75页 |
| ·细胞转染 | 第71-72页 |
| ·质粒转染 | 第71-72页 |
| ·siRNA 的合成与转染 | 第72页 |
| ·siRNA 的合成 | 第72页 |
| ·siRNA 的转染 | 第72页 |
| ·病毒感染 | 第72-73页 |
| ·免疫印迹 | 第73页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第73页 |
| ·实时定量PCR 检测 | 第73-75页 |
| ·细胞总RNA 提取 | 第73页 |
| ·反转录 | 第73页 |
| ·Realtime-PCR | 第73-75页 |
| ·PCR 引物和PCR 反应 | 第73-74页 |
| ·结果分析 | 第74-75页 |
| 3 结果 | 第75-78页 |
| ·QKI-5 抑制了化疗药物诱导的Hela 细胞的凋亡 | 第75-76页 |
| ·QKI-7 促进了化疗药物诱导的Hela 细胞的凋亡 | 第76-77页 |
| ·化疗药物降低了Hela 细胞中QKI-5 的转录并增高了QKI-7 的转录 | 第77-78页 |
| 4 讨论 | 第78-80页 |
| 实验三 QKI 对化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡调节的机制研究 | 第80-86页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第80页 |
| 2 方法 | 第80-81页 |
| ·细胞转染 | 第80页 |
| ·病毒感染 | 第80页 |
| ·免疫印迹 | 第80页 |
| ·ROS 检测 | 第80-81页 |
| 3 结果 | 第81-84页 |
| ·QKI-5 抑制了FOX03a 的表达 | 第81-82页 |
| ·QKI-7 促进了ROS 的生成 | 第82-84页 |
| 4 讨论 | 第84-86页 |
| 小结 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-96页 |
| 个人简历和研究成果 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
