中文摘要 | 第8-9页 |
英文摘要 | 第9-10页 |
缩略语表 | 第11-12页 |
1 前言 | 第12-14页 |
1.1 中成药鉴别研究概况 | 第12页 |
1.2 中成药原料药材传统鉴别 | 第12-13页 |
1.3 中成药原料药材分子鉴别 | 第13-14页 |
1.4 本研究的背景和意义 | 第14页 |
2 试验材料与方法 | 第14-27页 |
2.1 DNA序列分析法鉴别连翘败毒丸 | 第14-17页 |
2.1.1 实验材料 | 第14-15页 |
2.1.2 仪器与试剂 | 第15-16页 |
2.1.3 实验方法 | 第16-17页 |
2.1.3.1 DNA提取及PCR扩增 | 第16-17页 |
2.1.3.2 目的片段的克隆及测序 | 第17页 |
2.1.3.3 数据处理 | 第17页 |
2.2 位点特异性PCR法鉴别含有金银花的中成药 | 第17-20页 |
2.2.1 实验材料 | 第17-18页 |
2.2.2 仪器与试剂 | 第18-19页 |
2.2.3 实验方法 | 第19-20页 |
2.2.3.1 基于叶绿体序列的金银花及山银花鉴别引物设计 | 第19页 |
2.2.3.2 基于功能基因的金银花及山银花鉴别引物设计 | 第19-20页 |
2.2.3.3 中成药总DNA提取及PCR扩增 | 第20页 |
2.2.3.4 PCR产物测序 | 第20页 |
2.2.3.5 数据比对及BlastN分析 | 第20页 |
2.3 荧光测序分型法鉴别六味地黄丸中原料药材 | 第20-23页 |
2.3.1 实验材料 | 第20-21页 |
2.3.2 仪器与试剂 | 第21-22页 |
2.3.3 实验方法 | 第22-23页 |
2.3.3.1 总DNA提取及PCR扩增 | 第22页 |
2.3.3.2 荧光标记引物的选择及修饰 | 第22-23页 |
2.3.3.3 测序分析 | 第23页 |
2.4 断肠草水提液特异性PCR鉴定方法研究 | 第23-27页 |
2.4.1 实验材料 | 第23-24页 |
2.4.2 仪器与试剂 | 第24页 |
2.4.3 实验方法 | 第24-27页 |
2.4.3.1 鉴别引物的设计 | 第24-25页 |
2.4.3.2 药材水提液的总DNA提取 | 第25页 |
2.4.3.3 模板DNA质量的检测 | 第25-26页 |
2.4.3.4 不同因素对水提山银花药材扩增的影响 | 第26-27页 |
3 试验结果与分析 | 第27-47页 |
3.1 DNA序列分析法鉴别连翘败毒丸 | 第27-32页 |
3.1.1 连翘败毒丸DNA提取与PCR成功率 | 第27页 |
3.1.2 克隆成功率 | 第27页 |
3.1.3 参照序列 | 第27-29页 |
3.1.4 连翘败毒丸中原料药材克隆序列BlastN分析 | 第29-30页 |
3.1.5 连翘败毒丸中原料药材克隆序列的聚类分析 | 第30-32页 |
3.2 位点特异性PCR法鉴别含有金银花的中成药 | 第32-39页 |
3.2.1 中成药中总DNA的质量检测分析 | 第32-33页 |
3.2.2 中成药原料鉴别模板DNA的制备 | 第33-34页 |
3.2.3 中成药中金银花及山银花鉴别结果 | 第34-35页 |
3.2.4 中成药特异鉴别引物扩增产物序列BlastN分析 | 第35-36页 |
3.2.5 金银花FatB基因的DNA序列 | 第36-37页 |
3.2.6 鉴别标记的筛选及验证 | 第37-38页 |
3.2.7 中成药中金银花原料的分子鉴定 | 第38-39页 |
3.3 荧光测序分型法鉴别六味地黄丸中原料药材 | 第39-45页 |
3.3.1 荧光标记引物的筛选 | 第39-40页 |
3.3.2 荧光测序分型方法重复性及稳定性考察 | 第40页 |
3.3.3 丹皮基原植物及药材荧光测序分析 | 第40-43页 |
3.3.4 其他原料药材及基原植物荧光测序分析 | 第43-44页 |
3.3.5 六味地黄丸中原料药材荧光测序分析 | 第44-45页 |
3.4 断肠草水提液特异性PCR鉴定方法研究 | 第45-47页 |
3.4.1 药材水提液DNA提取及质量检测 | 第45页 |
3.4.2 药材水提液DNA提取方法的研究 | 第45-46页 |
3.4.3 不同引物扩增药材水提液的结果 | 第46页 |
3.4.4 鉴别位点特异性PCR引物设计 | 第46页 |
3.4.5 断肠草及金银花类药材及药材水提液特异性PCR鉴别 | 第46-47页 |
4 讨论 | 第47-50页 |
4.1 DNA的提取是鉴定中成药中原料药材的关键 | 第47页 |
4.2 PCR增强剂对中药材及成药DNA分子鉴定的影响 | 第47-49页 |
4.3 叶绿体序列在中成药中原料药材鉴别中的局限性 | 第49-50页 |
4.4 分子鉴别技术在中成药原料药材鉴别中的优越性 | 第50页 |
5 结论 | 第50-52页 |
参考文献 | 第52-56页 |
综述 | 第56-62页 |
参考文献 | 第59-62页 |
致谢 | 第62-63页 |
作者简介 | 第63-64页 |