| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 引言 | 第13-27页 |
| 1.1 细菌的分泌系统 | 第13-17页 |
| 1.1.1 革兰氏阴性细菌的分泌系统 | 第13页 |
| 1.1.2 SEC非依赖性分泌系统 | 第13-15页 |
| 1.1.3 SEC依赖性分泌系统 | 第15-17页 |
| 1.2 T5SS的研究现状 | 第17-22页 |
| 1.2.1 V型分泌系统的发现与功能概述 | 第17页 |
| 1.2.2 T5SS的结构组成及作用 | 第17-19页 |
| 1.2.3 BAM复合物的研究 | 第19-22页 |
| 1.3 嗜水气单胞菌的危害 | 第22-23页 |
| 1.4 BAM复合物对毒力因子级细菌耐药性的影响 | 第23-24页 |
| 1.5 蛋白质的翻译后修饰对于BAM复合物的影响 | 第24-26页 |
| 1.5.1 琥珀酰化的简述 | 第24-25页 |
| 1.5.2 琥珀酰化的发展与分布 | 第25页 |
| 1.5.3 琥珀酰化修饰的生理功能的研究 | 第25页 |
| 1.5.4 嗜水气单胞菌BamA蛋白的琥珀酰化修饰 | 第25-26页 |
| 1.6 本研究的意义与目的 | 第26-27页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第27-44页 |
| 2.1 菌株与载体 | 第27页 |
| 2.2 生化试剂与仪器 | 第27-30页 |
| 2.2.1 生化试剂 | 第27页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第27-28页 |
| 2.2.3 试剂的配制 | 第28-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-44页 |
| 2.3.1 细菌的培养方法 | 第30-31页 |
| 2.3.2 质粒的提取 | 第31页 |
| 2.3.3 扩增产物的纯化 | 第31-32页 |
| 2.3.4 PCR | 第32页 |
| 2.3.5 限制性内切酶酶切 | 第32页 |
| 2.3.6 链接转化 | 第32-33页 |
| 2.3.7 重组质粒的筛选 | 第33-34页 |
| 2.3.8 蛋白免疫印迹（Western blotting） | 第34页 |
| 2.3.9 嗜水气单胞菌bamA、bamB、bamC缺失菌的构建 | 第34-40页 |
| 1、上下游同源臂的设计与PCR扩增 | 第34-36页 |
| 2、扩增片段的回收 | 第36-37页 |
| 3、自杀载体pRE-112的提取与双酶切 | 第37-38页 |
| 4、基因敲除载体pRE112-bamA、B、C的构建 | 第38页 |
| 5、大肠杆菌Mc1061、S17-λpir感受态的制备与转化 | 第38-39页 |
| 6、第一次同源重组的筛选及验证 | 第39页 |
| 7、第二次同源重组的筛选与验证 | 第39-40页 |
| 2.3.10 嗜水气单胞菌bamA基因缺失回复菌株与定点突变菌株的构建 | 第40-41页 |
| 1、bamA定点突变引物的设计 | 第40页 |
| 2、bamA缺失回复株载体的构建 | 第40-41页 |
| 3、嗜水气单胞菌bamA蛋白琥珀酰化位点定点突变株的构建 | 第41页 |
| 4、电转感受态的制备与电转化 | 第41页 |
| 2.3.11 bamA、B、C基因缺失株同野生株生物学特性比较 | 第41-44页 |
| 1、MIC的测定 | 第42页 |
| 2、生长曲线的测定 | 第42页 |
| 3、溶血性分析 | 第42页 |
| 4、胞外蛋白酶活的检测 | 第42页 |
| 5、嗜水气单胞菌bamA、bamB、bamC缺失株膜蛋白的提取 | 第42-43页 |
| 6、蛋白浓度的测定 | 第43页 |
| 7、缺失株bamA、B、c膜蛋白组分的Western blot分析 | 第43-44页 |
| 第三章 bamA、B、c缺失株的构建与生物学功能的研究 | 第44-61页 |
| 3.1 引言 | 第44页 |
| 3.2 嗜水气单胞菌bamA、bamB、bamC缺失株的构建 | 第44-51页 |
| 3.2.1 bamA、B、C上下游同源臂的PCR扩增 | 第44-45页 |
| 3.2.2 敲除载体pRE112-bamA、pRE112-bamB、pRE112-bamC的构建与验证 | 第45-47页 |
| 3.2.3 嗜水气单胞菌缺失株⊿bamA、B、C的验证 | 第47-51页 |
| 3.3 嗜水气单胞菌bamA、B、C缺失株生物学特性的研究 | 第51-59页 |
| 1、MIC的测定 | 第51页 |
| 2、生长曲线的测定 | 第51-55页 |
| 3、溶血性分析 | 第55-56页 |
| 4、胞外蛋白酶活性分析 | 第56-57页 |
| 5、嗜水气单胞菌AbamA、bamB、bamC缺失株膜蛋白的提取 | 第57-58页 |
| 6、bamA、bamB、bamC敲除后对相关蛋白表达和转运的影响 | 第58-59页 |
| 3.4 小结 | 第59-61页 |
| 第四章 嗜水气单胞菌bamA基因回复株与点突变株的构建 | 第61-68页 |
| 4.1 引言 | 第61页 |
| 4.2 定点突变载体pBBR1-MCS1-bamA的构建 | 第61-62页 |
| 4.3 嗜水气单胞菌bamA琥珀酰化位点突变载体的构建 | 第62-63页 |
| 4.4 嗜水气单胞菌bamA琥珀酰化修饰位点对生物学功能的影响 | 第63-66页 |
| 4.4.1 不同抗生素MIC的检测 | 第63-64页 |
| 4.4.2 嗜水气单胞菌BamA琥珀酰化位点突变株在Oxy胁迫下的生长状态分析 | 第64-65页 |
| 4.4.3 嗜水气单胞菌BamA琥珀酰化位点突变株对胞外蛋白酶活性的影响 | 第65-66页 |
| 4.5 小结 | 第66-68页 |
| 第五章 总结与展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 硕士研究生期间发表的论文 | 第76页 |
