| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 1 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 苏铁保育的研究现状和前景 | 第12-13页 |
| 1.2 苏铁形态解剖学研究 | 第13-14页 |
| 1.3 苏铁与内生放线菌研究 | 第14-16页 |
| 1.3.1 植物的内生菌及其作用研究 | 第14-15页 |
| 1.3.2 植物内生菌天然产物的获取及应用研究 | 第15页 |
| 1.3.3 植物内生放线菌研究 | 第15页 |
| 1.3.4 植物内生放线菌多样性及分离方法研究 | 第15-16页 |
| 1.3.5 植物内生放线菌宿主多样性研究 | 第16页 |
| 1.4 植物内生放线菌的作用研究 | 第16-18页 |
| 1.4.1 内生放线菌对宿主植物的作用研究 | 第16-17页 |
| 1.4.2 内生放线菌对苏铁的影响 | 第17-18页 |
| 1.4.3 内生放线菌的应用前景 | 第18页 |
| 1.4.3.1 在农业生产上的应用前景 | 第18页 |
| 1.4.3.2 在医药新药开发上的应用 | 第18页 |
| 1.5 攀枝花苏铁根的营养关系研究 | 第18-19页 |
| 1.5.1 攀枝花苏铁根的养分含量研究 | 第18页 |
| 1.5.2 采用同位素示踪法对微生物和植物之间的营养关系研究 | 第18-19页 |
| 1.6 研究思路及内容 | 第19-20页 |
| 1.6.1 研究思路 | 第19-20页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第20页 |
| 1.7 研究目的 | 第20-21页 |
| 2 构建攀枝花苏铁与放线菌优势菌株的共生系统 | 第21-24页 |
| 2.1 材料与方法 | 第21-22页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.1.2 接种优势菌株 | 第21-22页 |
| 2.1.3 接种方案 | 第22页 |
| 2.1.4 接种效应检测 | 第22页 |
| 2.2 结果与分析 | 第22-23页 |
| 2.3 讨论 | 第23-24页 |
| 2.3.1 沙培和土培结瘤结果的比较 | 第23页 |
| 2.3.2 攀枝花苏铁的接种方法 | 第23-24页 |
| 3 攀枝花苏铁珊瑚状根形态解剖学结构研究 | 第24-26页 |
| 3.1 材料与方法 | 第24页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第24页 |
| 3.1.2 攀枝花苏铁珊瑚状根显微结构观察 | 第24页 |
| 3.2 结果与分析 | 第24-25页 |
| 3.2.1 攀枝花苏铁珊瑚状根形态解剖学结构观察结果 | 第24-25页 |
| 3.3 讨论 | 第25-26页 |
| 3.3.1 攀枝花苏铁珊瑚状根的形成 | 第25-26页 |
| 4 利用纯培养法对攀枝花苏铁珊瑚状根内生放线菌重分离 | 第26-34页 |
| 4.1 材料与方法 | 第26-29页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第26页 |
| 4.1.2 攀枝花苏铁珊瑚状根的清洗 | 第26页 |
| 4.1.3 攀枝花苏铁珊瑚状根表面灭菌处理 | 第26-27页 |
| 4.1.3.1 表面灭菌处理前的准备操作 | 第26页 |
| 4.1.3.2 表面灭菌操作 | 第26-27页 |
| 4.1.4 表面灭菌效应检测 | 第27页 |
| 4.1.5 培养基的选择与成分 | 第27页 |
| 4.1.6 攀枝花苏铁珊瑚状根内生放线菌重分离操作 | 第27页 |
| 4.1.7 攀枝花苏铁内生放线菌的初步划线分离 | 第27-28页 |
| 4.1.8 重分离攀枝花苏铁珊瑚状根内生放线菌的多样性 | 第28-29页 |
| 4.1.8.1 内生放线菌DNA的提取 | 第28页 |
| 4.1.8.2 放线菌的PCR扩增 | 第28-29页 |
| 4.2 结果与分析 | 第29-33页 |
| 4.2.1 植物表面灭菌效果 | 第29页 |
| 4.2.2 三种培养基重分离效果 | 第29-30页 |
| 4.2.3 鉴定重分离的菌株 | 第30-33页 |
| 4.2.3.1 不同时期的攀枝花苏铁珊瑚状根内生放线菌多样性比较 | 第30-32页 |
| 4.2.3.2 对重分离的优势菌株分析 | 第32-33页 |
| 4.3 讨论 | 第33-34页 |
| 4.3.1 内生放线菌培养基质的选择 | 第33页 |
| 4.3.2 不同时期分离的内生放线菌的多样性 | 第33-34页 |
| 5 利用16SrRNA基因克隆文库构建野生攀枝花苏铁珊瑚状根内生放线菌多样性 | 第34-44页 |
| 5.1 材料与方法 | 第34-37页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第34页 |
| 5.1.2 攀枝花苏铁珊瑚状根总DNA的提取 | 第34-35页 |
| 5.1.2.1 珊瑚状根原生质体的制备与内生微生物的富集 | 第34页 |
| 5.1.2.2 攀枝花苏铁珊瑚状根总DNA的提取 | 第34-35页 |
| 5.1.3 16SrRNA基因克隆文库的构建 | 第35页 |
| 5.1.3.1 16SrRNA基因的PCR扩增 | 第35页 |
| 5.1.4 攀枝花苏铁珊瑚状根16SrRNA片段的克隆 | 第35-37页 |
| 5.1.4.1 PCR产物纯化回收 | 第35-36页 |
| 5.1.4.2 连接 | 第36页 |
| 5.1.4.3 转化与蓝白斑挑选 | 第36页 |
| 5.1.4.4 阳性克隆筛选 | 第36-37页 |
| 5.1.4.5 送样测定 | 第37页 |
| 5.2 结果与分析 | 第37-43页 |
| 5.2.1 植物表面灭菌处理 | 第37页 |
| 5.2.2 攀枝花苏铁珊瑚状根总DNA的提取 | 第37页 |
| 5.2.3 16SrRNA基因片段的扩增 | 第37-38页 |
| 5.2.4 阳性克隆的检测结果 | 第38页 |
| 5.2.5 珊瑚状根中16SrRNA序列分析 | 第38-43页 |
| 5.3 讨论 | 第43-44页 |
| 5.3.1 免培养法的利弊 | 第43页 |
| 5.3.2 纯培养法和免培养法的比较 | 第43-44页 |
| 6 攀枝花苏铁菌根与无菌苗根的养分分析 | 第44-47页 |
| 6.1 材料与方法 | 第44-45页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第44页 |
| 6.1.2 实验方法 | 第44-45页 |
| 6.2 结果与分析 | 第45页 |
| 6.3 讨论 | 第45-47页 |
| 6.3.1 接种放线菌后攀枝花苏铁根部的养分变化 | 第45页 |
| 6.3.2 苏铁培养方式展望 | 第45-47页 |
| 7 采用同位素示踪法研究菌根改变攀枝花苏铁氮素的吸收形式 | 第47-51页 |
| 7.1 实验材料与方法 | 第47-48页 |
| 7.1.1 实验材料 | 第47页 |
| 7.1.2 ~(15)N标记法 | 第47-48页 |
| 7.1.3 植物材料的~(15)N/~(14)N分析与计算 | 第48页 |
| 7.2 结果与分析 | 第48-50页 |
| 7.2.1 N原子的转移量与转移方向 | 第48-50页 |
| 7.2.2 放线菌对攀枝花苏铁有机氮和无机氮吸收的影响 | 第50页 |
| 7.3 讨论 | 第50-51页 |
| 8 接种内生放线菌对攀枝花苏铁生物量的影响 | 第51-54页 |
| 8.1 实验材料与方法 | 第51页 |
| 8.1.1 实验材料 | 第51页 |
| 8.1.2 实验设计 | 第51页 |
| 8.2 结果与分析 | 第51-52页 |
| 8.2.1 生物量的变化研究 | 第51-52页 |
| 8.2.1.1 植株高度的变化 | 第51-52页 |
| 8.2.1.2 结瘤量的变化 | 第52页 |
| 8.3 讨论 | 第52-54页 |
| 8.3.1 生物量的测定 | 第52-54页 |
| 9 结论 | 第54-55页 |
| 9.1 本研究的主要结论 | 第54页 |
| 9.2 问题与展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 个人简介 | 第60-61页 |
| 导师简介 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
