| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 综述 | 第11-23页 |
| 1.1 丝状真菌全局性调控因子LaeA | 第11-17页 |
| 1.1.1 全局性调控因子LaeA的发现 | 第11-12页 |
| 1.1.2 LaeA对丝状真菌的全局性影响 | 第12-14页 |
| 1.1.3 LaeA是一种毒力因子 | 第14页 |
| 1.1.4LaeA全局性调控机制的研究 | 第14-17页 |
| 1.1.5 LaeA其他方面的研究 | 第17页 |
| 1.1.6 橘青霉中LaeA | 第17页 |
| 1.2 丝状真菌LaeA相互作用蛋白的研究 | 第17-20页 |
| 1.2.1 LaeA/VeA/VelB三聚复合体的发现 | 第18页 |
| 1.2.2 LaeA相互作用蛋白的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3 常用蛋白相互作用方法 | 第20-23页 |
| 1.3.1 酵母双杂交 | 第20页 |
| 1.3.2 GST-pull down技术 | 第20-21页 |
| 1.3.3 免疫共沉淀技术 | 第21页 |
| 1.3.4. 串联亲和纯化技术 | 第21-23页 |
| 第二章 绪论 | 第23-25页 |
| 2.1 研究意义 | 第23页 |
| 2.2 课题的提出 | 第23页 |
| 2.3 研究内容 | 第23-24页 |
| 2.4 技术路线 | 第24-25页 |
| 第三章 实验材料与方法 | 第25-41页 |
| 3.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第25页 |
| 3.1.2 培养基 | 第25页 |
| 3.1.3 抗生素 | 第25-26页 |
| 3.1.4 本课题中所用引物 | 第26页 |
| 3.1.5 实验试剂 | 第26-27页 |
| 3.1.6 主要仪器 | 第27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-41页 |
| 第四章 实验结果与分析 | 第41-63页 |
| 4.1 LaeA与VeA体外相互作用探究 | 第41-47页 |
| 4.1.1 异源共表达原理 | 第41-42页 |
| 4.1.2 橘青霉总RNA的提取及LaeA(cDNA)的获取 | 第42-43页 |
| 4.1.3 LaeA与VeA共表达载体构建 | 第43页 |
| 4.1.4 LaeA与VeA共表达蛋白纯化 | 第43-44页 |
| 4.1.5 LaeA蛋白相互作用中关键功能域SAM Domin的探究 | 第44页 |
| 4.1.6 SAM Domain缺失型LaeA基因的克隆 | 第44-46页 |
| 4.1.7 LaeA(△SAM)与VeA相互作用探究 | 第46-47页 |
| 4.2 SAM Domain对LaeA全局调控功能的影响 | 第47-51页 |
| 4.2.1 PGiHTGi-LaeA(△SAM)真菌表达载体的构建 | 第47-48页 |
| 4.2.2 SAM Domain对LaeA调控次级代谢能力的影响 | 第48-50页 |
| 4.2.3 SAM Domain对LaeA调控孢子产量方面的影响 | 第50-51页 |
| 4.3 串联亲和纯化法寻找与LaeA相互作用蛋白 | 第51-63页 |
| 4.3.1 链霉亲和素结合肽(SBP)序列的获取 | 第52-53页 |
| 4.3.2 PGiHTGi-SBP-LaeA-6xHis串联亲和表达载体的构建 | 第53-55页 |
| 4.3.3 PGiHTGi-TAP-LaeA的农杆菌转化及串联亲和表达 | 第55页 |
| 4.3.5 串联亲和纯化银染结果 | 第55-56页 |
| 4.3.6 质谱结果 | 第56-58页 |
| 4.3.7 三个可能的相互作用蛋白的生物信息学分析 | 第58-63页 |
| 第五章 讨论与展望 | 第63-69页 |
| 5.1 橘青霉LaeA与VeA体外相互作用的研究 | 第63页 |
| 5.2 橘青霉中SAM Domain对LaeA全局性调控功能的影响 | 第63-64页 |
| 5.3 橘青霉中与LaeA相互作用蛋白的分析 | 第64-66页 |
| 5.4 展望 | 第66-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
| 硕士期间发表的论文和奖励情况 | 第79页 |
