摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-8页 |
缩略词表 | 第9-14页 |
第一章 前言 | 第14-38页 |
一 狂犬病与狂犬病毒 | 第14-17页 |
(一) 狂犬病简介 | 第14-15页 |
(二) 狂犬病毒简介 | 第15-17页 |
二 抗体 | 第17-22页 |
(一) 抗体概述 | 第17-19页 |
(二) 单克隆抗体概述 | 第19-20页 |
(三) 小分子抗体概述 | 第20-21页 |
(四) 单链抗体概述 | 第21-22页 |
三 抗狂犬病毒抗体 | 第22-24页 |
(一) 抗狂犬病毒单克隆抗体 | 第22-24页 |
(二) 抗狂犬病毒单链抗体 | 第24页 |
四 重组蛋白下游纯化和复性技术 | 第24-36页 |
(一) 蛋白质纯化策略 | 第24-27页 |
(二) 蛋白质纯化技术 | 第27-31页 |
(三) 蛋白质复性技术 | 第31-36页 |
五 论文设计 | 第36-38页 |
(一) 论文目的 | 第36页 |
(二) 实验设计 | 第36-38页 |
第二章 抗狂犬病毒 G 蛋白单链抗体 scFv98H 纯化工艺研究 | 第38-57页 |
一 材料、试剂和仪器 | 第38-40页 |
(一) 材料、试剂和试剂盒 | 第38页 |
(二) 主要溶液 | 第38-39页 |
(三) 主要仪器 | 第39-40页 |
二 实验方法 | 第40-45页 |
(一) 菌体破碎 | 第40页 |
(二) 包涵体洗涤和溶解 | 第40-41页 |
(三) scFv98H 纯化层析介质的选择 | 第41-42页 |
(四) Nuvia Q 强阴离子交换层析条件优化 | 第42-43页 |
(五) 复性后目的蛋白的分子筛层析纯化 | 第43页 |
(六) SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第43-44页 |
(七) BCA 法测定蛋白浓度 | 第44页 |
(八) 细菌内毒素检查(凝胶法-鲎试剂) | 第44页 |
(九) 外源性 DNA 残留量测定(荧光染色法) | 第44-45页 |
三 实验结果 | 第45-55页 |
(一) 包涵体洗涤和溶解 | 第45页 |
(二) scFv98H 纯化层析介质的选择 | 第45-48页 |
(三) Nuvia Q 强阴离子交换层析条件优化 | 第48-54页 |
(五) 复性后目的蛋白的分子筛层析纯化 | 第54-55页 |
四 讨论 | 第55-56页 |
五 小结 | 第56-57页 |
第三章 抗狂犬病毒 G 蛋白单链抗体 scFv98H 复性工艺研究 | 第57-74页 |
一 材料、试剂和仪器 | 第57-58页 |
(一) 材料和试剂 | 第57页 |
(二) 主要溶液 | 第57-58页 |
(三) 主要仪器 | 第58页 |
二 实验方法 | 第58-62页 |
(一) scFv98H 透析复性 | 第58页 |
(二) scFv98H 柱上复性探索 | 第58-60页 |
(三) Qxl 柱上复性条件优化 | 第60-61页 |
(四) scFv98H 透析复性与柱上复性比较 | 第61-62页 |
(五) 抗体对狂犬病毒中和活性的研究 | 第62页 |
三 实验结果 | 第62-72页 |
(一) scFv98H 透析复性 | 第62-63页 |
(二) scFv98H 柱上复性探索 | 第63-66页 |
(三) Qxl 柱上复性条件优化 | 第66-71页 |
(四) scFv98H 透析复性与柱上复性比较 | 第71-72页 |
四 讨论 | 第72-73页 |
五 小结 | 第73-74页 |
第四章 scFv98H 的生产工艺及产品的鉴定分析 | 第74-84页 |
一 材料、试剂与仪器 | 第74-75页 |
(一) 材料和试剂 | 第74页 |
(二) 主要溶液 | 第74-75页 |
二 实验方法 | 第75-78页 |
(一) 纯化及复性工艺的具体操作条件 | 第75-76页 |
(二) 产品纯度测定 | 第76页 |
(三) 产品 Western blot 分析 | 第76-77页 |
(四) 产品分子量测定 | 第77页 |
(五) 产品中和活性测定 | 第77-78页 |
(六) 产品 DNA、LPS 残留量测定 | 第78页 |
(七) 产品异常毒性研究 | 第78页 |
三 实验结果 | 第78-83页 |
(一) 纯化工艺和复性工艺总结 | 第78-79页 |
(二) 产品纯度测定 | 第79-80页 |
(三) 产品 Western blot 分析 | 第80-81页 |
(四) 产品分子量测定 | 第81页 |
(五) 产品中和活性测定 | 第81页 |
(六) 产品 DNA、LPS 残留量测定 | 第81页 |
(七) 产品异常毒性研究 | 第81-83页 |
四 小结 | 第83-84页 |
结论 | 第84-85页 |
参考文献 | 第85-89页 |
作者简介 | 第89页 |
在学期间主要科研成果 | 第89-90页 |
致谢 | 第90页 |