| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 1 引言和文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 模式生物斑马鱼简述 | 第10-13页 |
| 1.1.1 斑马鱼研究概述 | 第10-11页 |
| 1.1.2 斑马鱼胚胎的心脏发育略述 | 第11-13页 |
| 1.2 CFL、CXXC5的生物学信息 | 第13-15页 |
| 1.2.1 CFL基因的生物学相关信息 | 第13-14页 |
| 1.2.2 CXXC5基因的生物学相关信息 | 第14-15页 |
| 1.3 TALEN打靶技术 | 第15-18页 |
| 1.3.1 TALEN打靶技术简介 | 第15-16页 |
| 1.3.2 TALEN打靶技术的原理 | 第16-17页 |
| 1.3.3 TALEN打靶技术的实际运用 | 第17-18页 |
| 1.4 本文的研究意义 | 第18-20页 |
| 2 材料和方法 | 第20-33页 |
| 2.1 材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 生物信息学数据库和主要软件 | 第20页 |
| 2.1.2 酶类和试剂盒 | 第20-21页 |
| 2.1.3 细胞系、菌株 | 第21页 |
| 2.1.4 构建Talen所用的质粒 | 第21-22页 |
| 2.1.5 其它试剂 | 第22页 |
| 2.1.6 主要实验仪器和耗材 | 第22-23页 |
| 2.2 基本实验方法 | 第23-29页 |
| 2.2.1 引物设计与合成 | 第23页 |
| 2.2.2 PCR扩增目的片段 | 第23-24页 |
| 2.2.3 PCR产物的纯化回收 | 第24页 |
| 2.2.4 质粒的提取与鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.5 酶切产物的纯化回收 | 第25-26页 |
| 2.2.6 连接 | 第26页 |
| 2.2.7 感受态细胞的制备方法 | 第26-27页 |
| 2.2.8 连接子的转化(热休克法) | 第27页 |
| 2.2.9 阳性克隆的筛选和鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2.10 mRNA的转录合成 | 第28页 |
| 2.2.11 基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.12 斑马鱼Morpholino的处理及显微注射 | 第29页 |
| 2.2.13 测序 | 第29页 |
| 2.3 TALEN实验方法 | 第29-33页 |
| 2.3.1 TALEN靶位点的确定 | 第29-30页 |
| 2.3.2 利用“单元组装法”构建TALEN表达载体 | 第30-31页 |
| 2.3.3 pCS-FokI-TALEN质粒的构建 | 第31页 |
| 2.3.4 pCS2-TALEN表达载体活性检测(以斑马鱼为例) | 第31页 |
| 2.3.5 斑马鱼突变体的筛选 | 第31-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-55页 |
| 3.1 CFL基因转基因斑马鱼的构建 | 第33-35页 |
| 3.1.1 斑马鱼pTol2-CMLC2-CFL-IRES-EGFP转基因表达载体的构建 | 第33-34页 |
| 3.1.2 CFL基因转基因斑马鱼的构建 | 第34-35页 |
| 3.2 TALEN打靶技术敲除斑马鱼CFL基因 | 第35-47页 |
| 3.2.0 斑马鱼CFL基因的靶位点分析结果 | 第35页 |
| 3.2.1 TALE repeats 的融合 | 第35-37页 |
| 3.2.2 TALEN重复序列的融合 | 第37-43页 |
| 3.2.3 pCS2-PEAS-L和pCS2-PERIl-R终载体的构建与鉴定 | 第43-45页 |
| 3.2.4 PCS2-PEAS-L和pCS2-PERR-R表达质粒体内活性检测 | 第45-47页 |
| 3.3 TALEN打靶技术敲除斑马鱼CXXC5基因 | 第47-55页 |
| 3.3.1 斑马鱼CXXC5基因的靶位点分析结果 | 第47页 |
| 3.3.2 TALE repeats的融合 | 第47-53页 |
| 3.3.3 构建Talen敲入同源表达载体 | 第53-54页 |
| 3.3.4 CXXC5敲除突变体的筛选 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| 4.1 CFL基因的突变体后续研究 | 第55-56页 |
| 4.2 CXXC5基因的后续研究 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 附录1 | 第62-63页 |
| 附录2 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
