| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略词表 | 第7-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-27页 |
| 1.1 PACAP 的简介 | 第11-12页 |
| 1.2 PAC1 的研究概况 | 第12-14页 |
| 1.3 PAC1 受体介导的生物学功能 | 第14-18页 |
| 1.3.1 PAC1 受体介导对神经系统的作用 | 第14-15页 |
| 1.3.2 PAC1 与细胞增殖分化的关系 | 第15页 |
| 1.3.3 PAC1 与细胞抗凋亡、抗损伤的关系 | 第15-16页 |
| 1.3.4 PAC1 介导在免疫和抗炎中的作用 | 第16-17页 |
| 1.3.5 PAC1 的高表达在某些生理病理过程中的作用 | 第17页 |
| 1.3.6 PAC1 的其他作用 | 第17-18页 |
| 1.4 四环素基因表达调控系统的研究概况 | 第18-23页 |
| 1.4.1 四环素诱导的基因表达系统的原理 | 第18-19页 |
| 1.4.2 Tet-on 和 Tet-off 系统的比较 | 第19-20页 |
| 1.4.3 Tet-on 表达调控系统的改进 | 第20-21页 |
| 1.4.4 Tet-on 基因表达调控系统的应用 | 第21-22页 |
| 1.4.5 利用改进的 Tet-on 表达调控系统构建 PAC1 的可控表达系统 | 第22-23页 |
| 1.5 本课题研究的目的、意义及主要研究内容 | 第23-27页 |
| 1.5.1 本课题研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第24-27页 |
| 第二章 实验材料与技术 | 第27-45页 |
| 2.1 主要仪器 | 第27-28页 |
| 2.2 材料 | 第28-34页 |
| 2.2.1 实验细胞株、质粒 | 第28页 |
| 2.2.2 工具酶、试剂盒及抗体 | 第28-29页 |
| 2.2.3 常用试剂 | 第29页 |
| 2.2.4 实验主要试剂配方 | 第29-34页 |
| 2.3 实验方法技术 | 第34-45页 |
| 2.3.1 基因工程技术 | 第34-38页 |
| 2.3.2 蛋白检测技术 | 第38-39页 |
| 2.3.3 细胞培养技术 | 第39-45页 |
| 第三章 Tet-on 表达调控系统的构建和鉴定 | 第45-55页 |
| 3.1 介绍 | 第45页 |
| 3.2 方法 | 第45-47页 |
| 3.2.1 pTRE-PAC1-EYFP 表达载体的构建和鉴定 | 第45-46页 |
| 3.2.2 四环素调节元件载体 pTet-on advanced 的转染、筛选及鉴定 | 第46页 |
| 3.2.3 四环素反应元件载体 pTRE-PAC1-EYFP 和线性潮霉素基因的共转染、筛选及鉴定 | 第46-47页 |
| 3.2.4 Dox 诱导 PAC1-EYFP 的表达及检测 | 第47页 |
| 3.2.5 转染细胞稳定性的鉴定 | 第47页 |
| 3.3 结果 | 第47-53页 |
| 3.3.1 pTRE-PAC1-EYFP 表达载体的构建 | 第47-48页 |
| 3.3.2 梯度浓度 Dox 诱导 PAC1-EYFP 的表达和检测 | 第48-51页 |
| 3.3.3 可调控表达细胞系 PAC1-Tet-CHO 的稳定性评价 | 第51-53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-54页 |
| 3.5 结论 | 第54-55页 |
| 第四章 增殖活性和抗凋亡活性指标的检测 | 第55-65页 |
| 4.1 介绍 | 第55页 |
| 4.2 方法 | 第55-57页 |
| 4.2.1 MTT 法检测细胞的生长曲线 | 第55页 |
| 4.2.2 流式细胞术检测细胞周期 | 第55-56页 |
| 4.2.3 胞内信号 cAMP 的检测 | 第56页 |
| 4.3.4 MTT 法测定缺血清培养细胞的残留活性 | 第56页 |
| 4.2.5 抗凋亡蛋白 bcl-2 表达水平的检测 | 第56页 |
| 4.2.6 凋亡蛋白 Caspase-3 活性的检测 | 第56-57页 |
| 4.3 结果 | 第57-63页 |
| 4.3.1 MTT 检测不同浓度 Dox 诱导的细胞生长曲线 | 第57-58页 |
| 4.3.2 流式细胞术检测细胞周期 | 第58-59页 |
| 4.3.3 胞内 cAMP 的含量与 PAC1 表达水平之间的关系 | 第59-60页 |
| 4.3.4 MTT 法测定不同浓度 Dox 诱导后缺血清培养细胞残留活性 | 第60页 |
| 4.3.5 抗凋亡蛋白 bcl-2 的表达水平与 PAC1 之间的关系 | 第60-61页 |
| 4.3.6 凋亡蛋白 Caspase-3 的活性与 PAC1 之间的关系 | 第61-63页 |
| 4.4 讨论 | 第63-64页 |
| 4.5 结论 | 第64-65页 |
| 第五章 总结、创新与展望 | 第65-68页 |
| 5.1 总结 | 第65-66页 |
| 5.2 创新 | 第66页 |
| 5.3 展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 附录 | 第76-80页 |
| 附录 1 pTet-on advanced Vector 图谱 | 第76-77页 |
| 附录 2 pTRE-Tight Vector 图谱 | 第77-78页 |
| 附录 3 pTRE-PAC1-EYFP 测序图 | 第78-80页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
