| 中文摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-25页 |
| 1.1 鸡传染性贫血病毒(CIAV)的研究进展 | 第14-21页 |
| 1.1.1 病原学 | 第14-16页 |
| 1.1.2 流行病学 | 第16-17页 |
| 1.1.3 发病机理 | 第17-19页 |
| 1.1.3.1 CIAV对骨髓中原始血细胞的影响 | 第17页 |
| 1.1.3.2 CIAV对淋巴组织的影响 | 第17-18页 |
| 1.1.3.3 CIAV诱导的细胞凋亡 | 第18-19页 |
| 1.1.3.4 CIAV日龄抵抗性 | 第19页 |
| 1.1.4 CIAV致病性的变异 | 第19-20页 |
| 1.1.5 CIAV对免疫功能的影响 | 第20-21页 |
| 1.2 鹦鹉喙羽病毒(PBFDV)的研究进展 | 第21-23页 |
| 1.2.1 PBFDV的整体概述 | 第21-22页 |
| 1.2.2 PBFDV的临床症状 | 第22页 |
| 1.2.3 PBFDV的诊断及检测 | 第22-23页 |
| 1.2.4 PBFDV的防治 | 第23页 |
| 1.3 斑点杂交检测技术的原理 | 第23-24页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-37页 |
| 2.1 试验材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 细胞 | 第25页 |
| 2.1.2 毒株来源 | 第25页 |
| 2.1.3 病料来源 | 第25页 |
| 2.1.4 主要试剂及其配制 | 第25-26页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第26页 |
| 2.2 方法 | 第26-37页 |
| 2.2.1 CIAVVP1基因与PBFDV ORF1基因的克隆及序列测定 | 第26-30页 |
| 2.2.1.1 基因组DNA的提取 | 第26页 |
| 2.2.1.2 引物的设计与合成 | 第26页 |
| 2.2.1.3 PCR扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.1.4 PCR产物的纯化 | 第27页 |
| 2.2.1.5 PCR回收产物的连接 | 第27-28页 |
| 2.2.1.6 DH5α感受态大肠杆菌的制备 | 第28页 |
| 2.2.1.7 连接产物的转化 | 第28页 |
| 2.2.1.8 质粒的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.1.9 重组质粒DNA的PCR鉴定 | 第29页 |
| 2.2.1.10 序列测定及分析 | 第29-30页 |
| 2.2.2 核酸探针的制备 | 第30页 |
| 2.2.2.1 核酸片段的定量 | 第30页 |
| 2.2.2.2 核酸探针的制备 | 第30页 |
| 2.2.3 核酸探针的敏感性检测 | 第30-31页 |
| 2.2.4 核酸探针的特异性检测 | 第31页 |
| 2.2.5 应用斑点杂交方法检测采集样品中的CIAV和PBFDV | 第31-32页 |
| 2.2.5.1 组织样品中DNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.5.2 使用核酸探针检测肉鸡病料中CIAV核酸 | 第32页 |
| 2.2.5.3 使用PCR检测肉鸡病料中CIAV核酸 | 第32页 |
| 2.2.5.4 使用核酸探针检测鹦鹉病料中PBFDV核酸 | 第32页 |
| 2.2.5.5 使用PCR检测鹦鹉病料中PBFDV核酸 | 第32页 |
| 2.2.6 CIAV全基因组扩增、克隆和测序 | 第32-34页 |
| 2.2.6.1 引物的设计与合成 | 第32-33页 |
| 2.2.6.2 DNA的提取 | 第33页 |
| 2.2.6.3 PCR的扩增 | 第33-34页 |
| 2.2.6.4 PCR产物的克隆测序 | 第34页 |
| 2.2.6.5 CIAV全基因组序列分析 | 第34页 |
| 2.2.7 PBFDV全基因组扩增、克隆和测序 | 第34-37页 |
| 2.2.7.1 引物的设计与合成 | 第34-35页 |
| 2.2.7.2 DNA的提取 | 第35页 |
| 2.2.7.3 PCR的扩增 | 第35页 |
| 2.2.7.4 PCR产物的克隆测序 | 第35-36页 |
| 2.2.7.5 PBFDV全基因组序列分析 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-43页 |
| 3.1 CIAV和PBFDV核酸斑点杂交检测方法的建立 | 第37-39页 |
| 3.1.1 CIAVVP1基因和PBFDV ORF1基因的克隆及序列测定 | 第37页 |
| 3.1.1.1 PCR扩增结果 | 第37页 |
| 3.1.1.2 扩增产物的序列测定结果 | 第37页 |
| 3.1.2 PCR扩增和探针的标记结果 | 第37-38页 |
| 3.1.3 制备核酸探针的灵敏度和特异性检测结果 | 第38-39页 |
| 3.2 应用斑点杂交反应检测采集样品中的CIAV和PBFDV | 第39-40页 |
| 3.2.1 应用制备探针和PCR检测肉鸡病料中CIAV核酸 | 第39页 |
| 3.2.2 应用制备探针和PCR检测鹦鹉病料中PBFDV核酸 | 第39-40页 |
| 3.3 CIAV全基因组测序与进化分析 | 第40-41页 |
| 3.3.1 阳性样品中CIAV的全基因组测序 | 第40-41页 |
| 3.4 PBFDV全基因组测序与进化分析 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-47页 |
| 4.1 CIAV和PBFDV核酸斑点杂交检测方法的建立 | 第43-44页 |
| 4.2 阳性样品中CIAV和PBFDV的全基因组测序和序列分析 | 第44-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第58页 |
