| 摘要 | 第4-6页 |
| Summary | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-22页 |
| 1 牛支原体与牛支原体病概述 | 第13-19页 |
| 1.1 牛支原体简介 | 第13-16页 |
| 1.1.1 牛支原体生物学特性 | 第13-14页 |
| 1.1.2 牛支原体膜蛋白研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2 牛支原体病及其危害 | 第16-19页 |
| 1.2.1 牛支原体病诊断方法研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2.2 牛支原体相关疫苗研究进展 | 第18-19页 |
| 2 二氢硫辛酰胺转乙酰基酶概述 | 第19-20页 |
| 2.1 二氢硫辛酰胺转乙酰基酶 | 第19页 |
| 2.2 二氢硫辛酰胺转乙酰基酶研究进展 | 第19-20页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 牛支原体PDHc-E2基因的克隆、序列分析及原核表达 | 第22-34页 |
| 1 材料 | 第22-23页 |
| 1.1 菌种、载体与实验动物 | 第22页 |
| 1.2 主要仪器与设备 | 第22页 |
| 1.3 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2 方法 | 第23-28页 |
| 2.1 化学试剂及培养基配制 | 第23-25页 |
| 2.1.1 化学试剂配制 | 第23-24页 |
| 2.1.2 培养基配制 | 第24-25页 |
| 2.2 牛支原体基因组DNA的提取 | 第25页 |
| 2.3 牛支原体武威分离株pdhc基因的扩增 | 第25页 |
| 2.4 牛支原体武威分离株pdhc基因及其编码蛋白序列的生物信息学分析 | 第25-26页 |
| 2.5 同源性分析及抗原表位预测 | 第26-27页 |
| 2.6 牛支原体武威分离株pdhc基因的定点突变 | 第27-28页 |
| 2.7 牛支原体pdhc基因的原核表达 | 第28页 |
| 2.7.1 原核表达载体pET-pdhc的构建 | 第28页 |
| 2.7.2 重组蛋白的诱导表达 | 第28页 |
| 3 结果 | 第28-32页 |
| 3.1 牛支原体pdhc基因的扩增 | 第28-29页 |
| 3.2 牛支原体pdhc基因编码蛋白序列的生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 3.2.1 PDHc-E2物理性质分析 | 第29页 |
| 3.2.2 跨膜区、信号肽预测 | 第29-30页 |
| 3.3 同源性分析及抗原表位预测 | 第30-31页 |
| 3.3.1 同源性分析 | 第30-31页 |
| 3.3.2 抗原表位预测 | 第31页 |
| 3.4 牛支原体武威分离株pdhc基因的定点突变 | 第31页 |
| 3.5 重组表达质粒pET-pdhc的鉴定 | 第31-32页 |
| 3.6 融合蛋白的诱导表达 | 第32页 |
| 4 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 PDHc-E2多克隆抗体的制备及其亚细胞定位 | 第34-40页 |
| 1 材料 | 第34页 |
| 1.1 菌种及试验动物 | 第34页 |
| 1.2 主要仪器 | 第34页 |
| 1.3 主要试剂 | 第34页 |
| 2 方法 | 第34-36页 |
| 2.1 表达产物的纯化 | 第34-35页 |
| 2.2 制备多抗血清 | 第35页 |
| 2.3 rPDHc-E2抗血清效价检测 | 第35页 |
| 2.4 牛支原体PDHc-E2亚细胞定位 | 第35-36页 |
| 2.4.1 牛支原体武威分离株膜蛋白的提取 | 第35-36页 |
| 2.4.2 ELISA试验 | 第36页 |
| 2.4.3 Westernblot试验 | 第36页 |
| 2.4.4 免疫荧光试验 | 第36页 |
| 3 结果 | 第36-39页 |
| 3.1 纯化产物的SDS-PAGE分析 | 第36-37页 |
| 3.2 多抗血清效价测定 | 第37-38页 |
| 3.3 PDHc-E2在牛支原体细胞内的分布 | 第38-39页 |
| 3.3.1 ELISA和Westernblot亚细胞定位 | 第38页 |
| 3.3.2 免疫荧光试验 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 PDHc-E2对EBL细胞的黏附及黏附抑制作用分析 | 第40-46页 |
| 1 材料 | 第40页 |
| 1.1 菌种及细胞 | 第40页 |
| 1.2 主要仪器 | 第40页 |
| 1.3 试剂与耗材 | 第40页 |
| 2 方法 | 第40-43页 |
| 2.1 试剂配制 | 第40-41页 |
| 2.2 多抗血清介导的补体杀菌试验 | 第41页 |
| 2.3 黏附及黏附抑制试验 | 第41-43页 |
| 2.3.1 间接免疫荧光检测rPDHc-E2抗血清抗牛支原体黏附EBL细胞 | 第41-42页 |
| 2.3.2 rPDHc-E2抗血清对牛支原体黏附的影响 | 第42页 |
| 2.3.3 rPDHc-E2抗血清对牛支原体入侵EBL细胞影响 | 第42-43页 |
| 3 结果 | 第43-45页 |
| 3.1 多抗血清介导的补体杀菌试验 | 第43页 |
| 3.2 间接免疫荧光检测rPDHc-E2抗血清抗牛支原体黏附EBL细胞 | 第43-44页 |
| 3.3 rPDHc-E2抗血清对牛支原体黏附的影响 | 第44页 |
| 3.4 rPDHc-E2抗血清对牛支原体入侵EBL细胞影响 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-46页 |
| 第五章 牛支原体武威分离株PDHc-E2单克隆抗体的制备 | 第46-52页 |
| 1 材料 | 第46页 |
| 1.1 细胞及试验动物 | 第46页 |
| 1.2 主要仪器 | 第46页 |
| 1.3 主要试剂 | 第46页 |
| 2 方法 | 第46-49页 |
| 2.1 试剂配制 | 第46-47页 |
| 2.2 动物免疫 | 第47页 |
| 2.3 细胞融合 | 第47-48页 |
| 2.3.1 SP2/0细胞的培养 | 第47页 |
| 2.3.2 饲养细胞的制备 | 第47页 |
| 2.3.3 小鼠脾细胞制备 | 第47-48页 |
| 2.3.4 细胞融合 | 第48页 |
| 2.3.5 测定最佳抗原包被量 | 第48页 |
| 2.4 阳性杂交瘤的筛选 | 第48页 |
| 2.5 阳性杂交瘤的亚克隆及冻存 | 第48-49页 |
| 2.6 阳性杂交瘤细胞的特异性鉴定 | 第49页 |
| 2.7 单克隆抗体亚型鉴定 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-50页 |
| 3.1 最佳抗原包被量测定 | 第49页 |
| 3.2 阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第49页 |
| 3.3 阳性杂交瘤细胞株特异性鉴定 | 第49-50页 |
| 3.4 单克隆抗体亚型鉴定 | 第50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 全文结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62-63页 |
| 导师简介 | 第63-64页 |
