| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-29页 |
| 1.1 引言 | 第13页 |
| 1.2 昆虫的化学感受器 | 第13-16页 |
| 1.2.1 昆虫化学感受器的一般结构 | 第13-15页 |
| 1.2.2 光肩星天牛触角化学感受器的扫描电子显微镜观察 | 第15-16页 |
| 1.3 昆虫感受外界化学信号的机理 | 第16-19页 |
| 1.3.1 嗅觉外围识别过程 | 第16-18页 |
| 1.3.2 嗅觉信号转导过程 | 第18-19页 |
| 1.4 昆虫嗅觉相关的蛋白 | 第19-22页 |
| 1.4.1 气味结合蛋白OBPs | 第19-20页 |
| 1.4.2 化学感受蛋白CSPs | 第20页 |
| 1.4.3 气味受体ORs | 第20-21页 |
| 1.4.4 感觉神经元膜蛋白SNMPs | 第21页 |
| 1.4.5 气味降解酶ODEs | 第21-22页 |
| 1.5 研究技术 | 第22-26页 |
| 1.5.1 mRNA 差异显示技术 | 第22-23页 |
| 1.5.2 引物退火控制技术 | 第23-25页 |
| 1.5.3 cDNA 末端快速延伸技术 | 第25-26页 |
| 1.6 研究背景 | 第26-27页 |
| 1.7 研究目的与意义 | 第27-28页 |
| 1.8 技术路线 | 第28-29页 |
| 第二章 m RNA 差异显示技术分离光肩星天牛触角特异性表达基因 | 第29-48页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第29-31页 |
| 2.1.1 供试材料 | 第29页 |
| 2.1.2 菌株与载体 | 第29页 |
| 2.1.3 试剂盒与试剂 | 第29页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2.1.5 主要试剂溶液的配制 | 第30-31页 |
| 2.2 试验方法 | 第31-41页 |
| 2.2.1 光肩星天牛总RNA 的提取及其浓度的检测 | 第31-32页 |
| 2.2.2 光肩星天牛总RNA 中DNA 的清除 | 第32页 |
| 2.2.3 光肩星天牛mRNA 的分离与纯化 | 第32-34页 |
| 2.2.4 光肩星天牛cDNA 第一链的合成 | 第34页 |
| 2.2.5 光肩星天牛DDRT-PCR 反应体系的优化. | 第34-35页 |
| 2.2.6 光肩星天牛DDRT-PCR 扩增 | 第35-36页 |
| 2.2.7 6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第36页 |
| 2.2.8 银染显色 | 第36-37页 |
| 2.2.9 差异显示条带的筛选及回收 | 第37页 |
| 2.2.10 反向Northern 斑点杂交鉴定 | 第37-40页 |
| 2.2.11 目的片段连接T/A 载体 | 第40页 |
| 2.2.12 连接产物的转化 | 第40页 |
| 2.2.13 阳性克隆的鉴定 | 第40-41页 |
| 2.2.14 阳性克隆的序列测定及其同源性分析 | 第41页 |
| 2.3 试验结果与分析 | 第41-46页 |
| 2.3.1 总RNA 的提取纯化 | 第41页 |
| 2.3.2 DDRT-PCR 退火温度的优化 | 第41-42页 |
| 2.3.3 DDRT-PCR cDNA 模板量、dNTP 浓度及Taq 酶量的优化 | 第42-44页 |
| 2.3.4 条件优化后差异条带显示结果 | 第44页 |
| 2.3.5 触角特异表达基因差异显示分析 | 第44页 |
| 2.3.6 触角差异表达基因序列分析 | 第44-46页 |
| 2.4 讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 引物退火控制技术分离光肩星天牛触角特异性表达基因 | 第48-55页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第48页 |
| 3.2 试验方法 | 第48-50页 |
| 3.2.1 光肩星天牛mRNA 的提取、分离与纯化 | 第48-49页 |
| 3.2.2 光肩星天牛cDNA 第一链的合成 | 第49页 |
| 3.2.3 光肩星天牛GeneFishing PCR 扩增 | 第49-50页 |
| 3.2.4 差异表达条带的回收 | 第50页 |
| 3.2.5 目的片段的连接、转化及鉴定 | 第50页 |
| 3.2.6 阳性克隆的序列测定及其同源性分析 | 第50页 |
| 3.3 试验结果与分析 | 第50-54页 |
| 3.3.1 GeneFishing PCR 扩增结果检测 | 第50-51页 |
| 3.3.2 触角差异表达基因序列分析 | 第51-54页 |
| 3.4 讨论 | 第54-55页 |
| 第四章 光肩星天牛触角嗅觉相关蛋白基因的克隆与序列分析 | 第55-73页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第55页 |
| 4.2 试验方法 | 第55-60页 |
| 4.2.1 光肩星天牛mRNA 的提取、分离与纯化 | 第55页 |
| 4.2.2 光肩星天牛cDNA 第一链的合成 | 第55-56页 |
| 4.2.3 RACE PCR 阳性对照试验 | 第56-58页 |
| 4.2.4 RACE PCR 扩增 | 第58-59页 |
| 4.2.5 目的条带的回收 | 第59-60页 |
| 4.2.6 目的片段的连接、转化及鉴定 | 第60页 |
| 4.2.7 阳性克隆的序列测定及其分析 | 第60页 |
| 4.3 试验结果与分析 | 第60-71页 |
| 4.3.1 RACE 扩增结果. | 第60页 |
| 4.3.2 蛋白序列分析 | 第60-68页 |
| 4.3.3 蛋白二级结构预测 | 第68-70页 |
| 4.3.2 蛋白三级结构预测 | 第70-71页 |
| 4.4 讨论 | 第71-73页 |
| 第五章 结论与展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 作者简介 | 第82页 |
