| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 目录 | 第12-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-40页 |
| 1.1 TMEM59 和 TMEM59L 基因的结构特征 | 第14-15页 |
| 1.2 TMEM59 和 TMEM59L 基因的转录和分布 | 第15-17页 |
| 1.3 TMEM59 和 TMEM59L 蛋白质的组成和特性 | 第17-22页 |
| 1.4 TMEM59 和 TMEM59L 的同源性分析 | 第22-23页 |
| 1.5 TMEM59 和 TMEM59L 蛋白质结构分析 | 第23-24页 |
| 1.6 TMEM59 和 TMEM59L 系统生物学分析 | 第24-26页 |
| 1.7 TMEM59 和 TMEM59L 的研究进展 | 第26-28页 |
| 1.8 神经干细胞的研究进展 | 第28-32页 |
| 1.8.1 神经干细胞介绍 | 第28-30页 |
| 1.8.2 细胞因子对神经干细胞的影响 | 第30-31页 |
| 1.8.3 Sirtuin 基因家族的作用 | 第31-32页 |
| 1.9 APP 蛋白加工和运输的研究 | 第32-40页 |
| 第二章 去乙酰化酶抑制剂对 C17.2 NSCs 的影响 | 第40-70页 |
| 2.1 实验材料 | 第40-45页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第40-41页 |
| 2.1.2 实验动物、菌株、细胞 | 第41页 |
| 2.1.3 实验试剂及耗材 | 第41-42页 |
| 2.1.4 实验室常用试剂的配制 | 第42-43页 |
| 2.1.5 细胞实验用试剂的配制 | 第43-45页 |
| 2.2 实验方法 | 第45-52页 |
| 2.2.1 Real-time PCR 引物 | 第45-46页 |
| 2.2.2 组织总 RNA 的提取和反转录 PCR | 第46-47页 |
| 2.2.3 普通 PCR | 第47-48页 |
| 2.2.4 Real-time PCR 检测目的基因表达水平 | 第48-49页 |
| 2.2.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第49页 |
| 2.2.6 Nicotinamide 和 TSA 作用 C17.2NSCs | 第49-50页 |
| 2.2.7 药物作用下溶酶体的变化 | 第50页 |
| 2.2.8 DAPI 染色法 | 第50页 |
| 2.2.9 SDS-PAGE 蛋白电泳 | 第50-51页 |
| 2.2.10 Western Blot 检测 | 第51-52页 |
| 2.2.11 统计方法 | 第52页 |
| 2.3 结果 | 第52-64页 |
| 2.3.1 TMEM59 和 TMEM59L 存在不同的转录分布 | 第52-54页 |
| 2.3.2 Nicotinamide 和 TSA 抑制 C17.2 神经干细胞的增殖 | 第54页 |
| 2.3.3 C17.2 神经干细胞形态的影响 | 第54-55页 |
| 2.3.4 溶酶体在 C17.2 神经干细胞中的定位 | 第55-56页 |
| 2.3.5 Nicotinamide 和 TSA 促进 C17.2 神经干细胞凋亡 | 第56-58页 |
| 2.3.6 sirtuin 家族的转录和调节 | 第58-62页 |
| 2.3.7 Nicotinamide 和 TSA 对增殖和凋亡相关蛋白的影响 | 第62-64页 |
| 2.4 讨论 | 第64-70页 |
| 第三章 TMEM59 和 TMEM59L 的定位和功能 | 第70-106页 |
| 3.1 实验材料 | 第70-77页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第70-71页 |
| 3.1.2 实验动物、菌株、细胞株和质粒 | 第71-72页 |
| 3.1.3 实验试剂及耗材 | 第72-74页 |
| 3.1.4 实验室常用试剂的配制 | 第74-76页 |
| 3.1.5 细胞实验用试剂的配制 | 第76-77页 |
| 3.2 实验方法 | 第77-86页 |
| 3.2.1 多个基因的引物设计 | 第77-78页 |
| 3.2.2 DNA 连接反应 | 第78-79页 |
| 3.2.3 质粒的转化 | 第79页 |
| 3.2.4 阳性菌落的鉴定 | 第79-80页 |
| 3.2.5 质粒的抽提 | 第80-81页 |
| 3.2.6 酶切和测序 | 第81页 |
| 3.2.7 细胞株 Hek293T 的培养 | 第81-82页 |
| 3.2.8 质粒转染 Hek293T 细胞 | 第82页 |
| 3.2.9 细胞器染色 | 第82-83页 |
| 3.2.10 DAPI 染色法 | 第83页 |
| 3.2.11 不同质粒的共转染细胞 | 第83-84页 |
| 3.2.12 细胞总蛋白的抽提 | 第84-85页 |
| 3.2.13 SDS-PAGE 蛋白电泳 | 第85页 |
| 3.2.14 Western Blot 检测 | 第85-86页 |
| 3.3 结果 | 第86-102页 |
| 3.3.1 TMEM59 定位到囊泡状结构 | 第86-89页 |
| 3.3.2 TMEM59 定位到溶酶体等酸性囊泡 | 第89-90页 |
| 3.3.3 TMEM59L 定位到囊泡状结构 | 第90-93页 |
| 3.3.4 TMEM59L 缺失突变影响 TMEM59L 的定位 | 第93-95页 |
| 3.3.5 TMEM59L 定位在溶酶体等酸性囊泡 | 第95页 |
| 3.3.6 TMEM59 和 TMEM59L 共定位 | 第95-96页 |
| 3.3.7 TMEM59 和 TMEM59L 增加 APP 蛋白在细胞中的水平 | 第96-97页 |
| 3.3.8 TMEM59 和 TMEM59L 影响 GDI1 在细胞中的水平 | 第97-99页 |
| 3.3.9 TMEM59 和 TMEM59L 影响 GDI2 在细胞中的水平 | 第99-101页 |
| 3.3.10 TMEM59 和 TMEM59L 对 BACE2 的影响 | 第101-102页 |
| 3.4 讨论 | 第102-106页 |
| 第四章 结论和展望 | 第106-108页 |
| 4.1 结论 | 第106-107页 |
| 4.2 展望 | 第107-108页 |
| 附录 | 第108-121页 |
| 参考文献 | 第121-137页 |
| 作者在攻读博士学位期间公开发表的成果 | 第137-138页 |
| 致谢 | 第138页 |
