| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-28页 |
| 1.1 除虫菊酯简介 | 第14-16页 |
| 1.2 除虫菊酯生物合成代谢研究 | 第16-19页 |
| 1.2.1 除虫菊酯的生物合成 | 第16-17页 |
| 1.2.2 除虫菊酯合成部位研究 | 第17-18页 |
| 1.2.3 除虫菊酯生物合成途径中CDS基因的研究 | 第18-19页 |
| 1.3 提高除虫菊酯含量的几种途径 | 第19-22页 |
| 1.3.1 除虫菊传统育种 | 第19-20页 |
| 1.3.2 除虫菊离体组织培养 | 第20-21页 |
| 1.3.3 基因工程技术 | 第21-22页 |
| 1.4 影响农杆菌转化效率的因素 | 第22-26页 |
| 1.4.1 启动子的选择对转化的影响 | 第22-23页 |
| 1.4.2 抗性素对转化效果的影响 | 第23-24页 |
| 1.4.3 延迟培养时间对转化体系的影响 | 第24-25页 |
| 1.4.4 乙酰丁香酮对遗传转化的影响 | 第25-26页 |
| 1.5 研究目的及主要研究内容 | 第26-28页 |
| 1.5.1 研究目的及意义 | 第26页 |
| 1.5.2 主要研究内容 | 第26-28页 |
| 第二章 CDS启动子和Rubisco启动子在除虫菊中的遗传转化研究 | 第28-38页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 试验材料 | 第28-30页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第28-29页 |
| 2.2.2 根癌农杆菌菌株及质粒 | 第29页 |
| 2.2.3 常用分子生物学试剂 | 第29页 |
| 2.2.4 主要仪器和设备 | 第29页 |
| 2.2.5 常用溶液的配制 | 第29-30页 |
| 2.2.6 培养基及添加成分 | 第30页 |
| 2.2.7 培养条件 | 第30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-33页 |
| 2.3.1 根癌农杆菌的活化及工程菌液的制备 | 第30-31页 |
| 2.3.2 农杆菌介导的叶盘法转化除虫菊的程序 | 第31页 |
| 2.3.3 GUS表达分析 | 第31页 |
| 2.3.4 显微镜观察 | 第31-32页 |
| 2.3.5 抗性植株叶片DNA的提取(CTAB法) | 第32页 |
| 2.3.6 抗性苗叶片PCR的检测 | 第32-33页 |
| 2.4 结果与分析 | 第33-36页 |
| 2.4.1 Rubisco：：GUS转基因除虫菊鉴定 | 第33-35页 |
| 2.4.1.1 除虫菊抗性苗的PCR检测 | 第33-34页 |
| 2.4.1.2 除虫菊转基因植株的GUS染色 | 第34-35页 |
| 2.4.2 CDS：：GUS除虫菊抗性苗检测 | 第35-36页 |
| 2.4.2.1 除虫菊抗性苗的PCR检测 | 第35页 |
| 2.4.2.2 除虫菊转基因植株的GUS染色 | 第35-36页 |
| 2.5 讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 农杆菌介导的CDS基因转化除虫菊的研究 | 第38-51页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 试验材料 | 第38-40页 |
| 3.2.1 植物材料 | 第38页 |
| 3.2.2 根癌农杆菌菌株及质粒 | 第38页 |
| 3.2.3 分子生物学试剂 | 第38-39页 |
| 3.2.4 主要仪器设备 | 第39页 |
| 3.2.5 常用溶液的配制 | 第39页 |
| 3.2.6 培养基及添加成分 | 第39-40页 |
| 3.2.7 培养条件 | 第40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-43页 |
| 3.3.1 根癌农杆菌的活化及工程菌液的制备 | 第40页 |
| 3.3.2 农杆菌介导的叶盘法转化除虫菊的程序 | 第40页 |
| 3.3.3 农杆菌介导的除虫菊遗传转化体系的优化 | 第40页 |
| 3.3.3.1 乙酰丁香酮(AS)对转化的影响 | 第40页 |
| 3.3.3.2 延迟培养时间对转化的影响 | 第40页 |
| 3.3.4 CTAB法提取除虫菊基因组的总DNA并检测 | 第40页 |
| 3.3.5 转基因除虫菊CDS基因表达强度的检测 | 第40-43页 |
| 3.3.5.1 Trizol试剂盒提取除虫菊总RNA | 第41页 |
| 3.3.5.2 RAN纯化 | 第41-42页 |
| 3.3.5.3 RNA质量检测 | 第42页 |
| 3.3.5.4 RNA反转录 | 第42-43页 |
| 3.3.5.5 荧光实时定量PCR定量分析 | 第43页 |
| 3.4 结果与分析 | 第43-49页 |
| 3.4.1 乙酰丁香酮对转化的影响 | 第43-45页 |
| 3.4.2 延迟培养时间对转化的影响 | 第45-46页 |
| 3.4.3 转基因植株的检测 | 第46-49页 |
| 3.4.3.1 转化植株的PCR检测 | 第46-47页 |
| 3.4.3.2 RNA质量检测 | 第47-49页 |
| 3.5 讨论 | 第49-51页 |
| 3.5.1 除虫菊遗传转化体系的优化 | 第49-50页 |
| 3.5.2 CDS基因在转基因除虫菊植株中表达分析 | 第50-51页 |
| 第四章 继代次数对除虫菊叶片除虫菊酯含量的影响 | 第51-59页 |
| 4.1 前言 | 第51页 |
| 4.2 试验材料 | 第51-52页 |
| 4.2.1 植物材料 | 第51-52页 |
| 4.2.2 试验所用试剂 | 第52页 |
| 4.2.3 主要仪器和设备 | 第52页 |
| 4.3 试验方法 | 第52-54页 |
| 4.3.1 除虫菊酯的提取与分析方法 | 第52-53页 |
| 4.3.1.1 除虫菊标准曲线的绘制 | 第52页 |
| 4.3.1.2 叶片中除虫菊酯的提取和分析方法 | 第52-53页 |
| 4.3.2 数据处理 | 第53页 |
| 4.3.3 除虫菊组培苗的继代培养 | 第53页 |
| 4.3.4 培养条件 | 第53-54页 |
| 4.4 结果与分析 | 第54-57页 |
| 4.4.1 除虫菊标准提取物的测定 | 第54页 |
| 4.4.2 不同继代次数叶片中除虫菊酯的含量变化 | 第54-56页 |
| 4.4.3 继代次数对除虫菊生长势和生根的影响 | 第56-57页 |
| 4.5 结论与讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第59-64页 |
| 5.1 主要结论 | 第59-60页 |
| 5.2 讨论 | 第60-64页 |
| 5.2.1 CDS启动子的组织特异性 | 第60-61页 |
| 5.2.2 CDS基因的表达与功能特性 | 第61-62页 |
| 5.2.3 继代次数对除虫菊组培苗除虫菊酯含量的影响 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
