| 目录 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略词表（Abbreviation) | 第11-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-33页 |
| 1.1 碱性果胶酶概述 | 第13-18页 |
| 1.1.1 果胶酶分类 | 第13页 |
| 1.1.2 碱性聚半乳糖醛酸裂解酶生产菌株 | 第13-14页 |
| 1.1.3 B.subtilis聚半乳糖醛酸裂解酶(PGLs)分子解析 | 第14-15页 |
| 1.1.4 碱性果胶酶的生产 | 第15-17页 |
| 1.1.5 碱性果胶酶的应用 | 第17-18页 |
| 1.2 发酵工艺及其优化 | 第18-21页 |
| 1.2.1 发酵工艺 | 第18-19页 |
| 1.2.2 培养基优化 | 第19页 |
| 1.2.3 底物预处理 | 第19-20页 |
| 1.2.4 pH优化 | 第20页 |
| 1.2.5 其他优化方法 | 第20-21页 |
| 1.3 蛋白表达系统 | 第21-27页 |
| 1.3.1 大肠杆菌表达系统 | 第21-22页 |
| 1.3.2 毕赤酵母表达系统 | 第22-23页 |
| 1.3.3 枯草芽孢杆菌表达系统 | 第23-25页 |
| 1.3.4 丝状真菌表达系统 | 第25-26页 |
| 1.3.5 其他表达系统 | 第26-27页 |
| 1.4 苎麻脱胶研究进展 | 第27-31页 |
| 1.4.1 脱胶工艺 | 第27-28页 |
| 1.4.2 酶法脱胶 | 第28-29页 |
| 1.4.3 脱胶关键酶探索 | 第29-30页 |
| 1.4.4 脱胶产物分析与效果评价 | 第30-31页 |
| 1.5 本论文的立题依据和主要内容 | 第31-33页 |
| 第二章 碱性果胶酶补料发酵条件优化 | 第33-47页 |
| 2.1 材料和方法 | 第33-35页 |
| 2.1.1 菌株 | 第33页 |
| 2.1.2 培养基及培养条件 | 第33-34页 |
| 2.1.3 常用试剂与设备 | 第34页 |
| 2.1.4 碳源底物的酶预处理 | 第34页 |
| 2.1.5 分析方法 | 第34-35页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第35-46页 |
| 2.2.1 摇瓶补料条件优化 | 第35-38页 |
| 2.2.2 底物预处理对产酶的影响 | 第38-40页 |
| 2.2.3 7.5 L发酵罐补料条件优化 | 第40-46页 |
| 2.3 小结 | 第46-47页 |
| 第三章 B.subtilis 7-3-3pelA基因的同源过表达 | 第47-66页 |
| 3.1 材料与方法 | 第47-53页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第47页 |
| 3.1.2 试剂、工具酶与设备 | 第47-48页 |
| 3.1.3 培养基和发酵条件 | 第48-49页 |
| 3.1.4 PelA纯化和性质分析 | 第49页 |
| 3.1.5 pelA测序、建模与系统进化分析 | 第49页 |
| 3.1.6 表达载体构建 | 第49-50页 |
| 3.1.7 电转B.subtilis 7-3-3 | 第50-51页 |
| 3.1.8 苎麻纤维酶法脱胶 | 第51页 |
| 3.1.9 分析方法 | 第51-53页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第53-65页 |
| 3.2.1 PelA纯化及其酶学性质研究 | 第53-54页 |
| 3.2.2 pelA基因克隆、测序、同源模建与系统进化分析 | 第54-56页 |
| 3.2.3 构建E coli-B.subtilis穿梭质粒pNW33N-pelA | 第56-57页 |
| 3.2.4 pelA在B.subtilis 7-3-3中同源过表达 | 第57-59页 |
| 3.2.5 过表达菌株B-pN-pelA粗酶液的酶系分析 | 第59页 |
| 3.2.6 在7.5 L发酵罐中利用过表达菌株B-pN-pelA生产PGL | 第59-61页 |
| 3.2.7 过表达菌株B-pN-pelA粗酶液对苎麻纤维的脱胶能力研究 | 第61-63页 |
| 3.2.8 过表达菌株B-pN-pelA遗传稳定性研究 | 第63-65页 |
| 3.3 小结 | 第65-66页 |
| 第四章 B.subtilis 7-3-3表达载体构建及pelB,pelC过表达 | 第66-83页 |
| 4.1 材料与方法 | 第66-72页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第66页 |
| 4.1.2 试剂、工具酶与设备 | 第66-67页 |
| 4.1.3 培养基和发酵条件 | 第67页 |
| 4.1.4 pelB和pelC测序 | 第67-68页 |
| 4.1.5 pelB,pelC系统进化树构建与同源模建 | 第68页 |
| 4.1.6 表达载体构建 | 第68-69页 |
| 4.1.7 电转B subtilis 7-3-3 | 第69-70页 |
| 4.1.8 PelB,PelC纯化 | 第70页 |
| 4.1.9 分析方法 | 第70-72页 |
| 4.2 结果与分析 | 第72-81页 |
| 4.2.1 pelB,pelC测序、系统进化分析与同源模建 | 第72-74页 |
| 4.2.2 表达质粒pPNW33N-PAT构建 | 第74-76页 |
| 4.2.3 重组质粒pPN-PA-pelB,pPN-PA-pelB构建 | 第76页 |
| 4.2.4 转化子验证 | 第76-77页 |
| 4.2.5 产酶分析与Western blotting验证 | 第77-80页 |
| 4.2.6 PelC镍柱纯化 | 第80-81页 |
| 4.3 讨论 | 第81-82页 |
| 4.4 小结 | 第82-83页 |
| 第五章 聚半乳糖醛酸裂解酶在毕赤酵母中表达、酶学性质分析及其脱胶能力比较 | 第83-107页 |
| 5.1 材料与方法 | 第83-89页 |
| 5.1.1 菌株与质粒 | 第83页 |
| 5.1.2 试剂、工具酶和设备 | 第83-84页 |
| 5.1.3 培养基 | 第84页 |
| 5.1.4 重组质粒pPIC9K-pelA,pPIC9K-pelB,pPIC9K-pelC构建 | 第84-85页 |
| 5.1.5 pPIC9K-pelA,pPIC9K-pelB,pPIC9K-pelC转化P.pastoris GS115 | 第85-87页 |
| 5.1.6 P.pastoris GS115转化子筛选与验证 | 第87页 |
| 5.1.7 P.pastoris GS115转化子发酵与产酶诱导 | 第87页 |
| 5.1.8 粗酶液浓缩 | 第87页 |
| 5.1.9 PelA PelB PelC蛋白纯化和PelB PelC的性质测定 | 第87-88页 |
| 5.1.10 去糖基化 | 第88页 |
| 5.1.11 酶法脱胶 | 第88页 |
| 5.1.12 Pels对不同底物的降解 | 第88页 |
| 5.1.13 分析方法 | 第88-89页 |
| 5.2 结果与讨论 | 第89-106页 |
| 5.2.1 构建重组质粒pPIC9K-pelA,pPIC9K- pelB,pPIC9K-pelC | 第89页 |
| 5.2.2 转化子筛选与验证 | 第89-90页 |
| 5.2.3 产酶分析 | 第90-91页 |
| 5.2.4 PelA,PelB,PelC镍柱纯化 | 第91-94页 |
| 5.2.5 Pe1A,PelB,PelC底物特异性研究 | 第94-96页 |
| 5.2.6 PelA,PelB,PelC的去糖基化 | 第96-98页 |
| 5.2.7 PelB和PelC的酶学性质研究 | 第98-100页 |
| 5.2.8 PelA,PelB和PelC的脱胶能力差异与协同作用初探 | 第100-106页 |
| 5.3 小结 | 第106-107页 |
| 全文总结与展望 | 第107-110页 |
| 参考文献 | 第110-125页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第125-126页 |
| 致谢 | 第126-128页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第128页 |
