| 中文摘要 | 第2-3页 |
| ABSTRACT | 第3页 |
| 目录 | 第4-7页 |
| 符号说明 | 第7-8页 |
| 引言 | 第8-10页 |
| 第1章 材料和方法 | 第10-24页 |
| 1.1 实验材料 | 第10-13页 |
| 1.1.1 实验细胞株 | 第10页 |
| 1.1.2 实验仪器设备及产地 | 第10-11页 |
| 1.1.3 实验主要试剂及产地 | 第11-13页 |
| 1.1.3.1 siRNA | 第11页 |
| 1.1.3.2 荧光PCR引物 | 第11-12页 |
| 1.1.3.3 western blot试剂 | 第12页 |
| 1.1.3.4 流式细胞术试剂 | 第12页 |
| 1.1.3.5 其他主要试剂 | 第12-13页 |
| 1.2 实验方法及步骤 | 第13-23页 |
| 1.2.1 细胞培养 | 第13-15页 |
| 1.2.1.1 细胞复苏 | 第13页 |
| 1.2.1.2 细胞传代步骤 | 第13-14页 |
| 1.2.1.3 顺铂耐药细胞SKOV3/cDDP的诱导 | 第14-15页 |
| 1.2.1.3.1 间歇梯度递增诱导法 | 第14页 |
| 1.2.1.3.2 MTT法检测SKOV3/cDDP细胞的耐药指(resistance index,RI) | 第14-15页 |
| 1.2.1.4 细胞的收集 | 第15页 |
| 1.2.1.5 细胞冻存 | 第15页 |
| 1.2.2 细胞转染 | 第15-17页 |
| 1.2.2.1 用荧光标记的siRNA检测最佳条件 | 第15-16页 |
| 1.2.2.2 筛选最佳的siRNA-RRM2-X | 第16-17页 |
| 1.2.3 荧光PCR检测转染前后RRM2mRNA表达 | 第17-18页 |
| 1.2.3.1 总RNA的提取和鉴定 | 第17页 |
| 1.2.3.2 cDNA的合成 | 第17-18页 |
| 1.2.3.3 real-time PCR反应 | 第18页 |
| 1.2.4 MTT法检测细胞耐药逆转 | 第18-19页 |
| 1.2.4.1 细胞准备 | 第18-19页 |
| 1.2.4.2 用顺铂和吉西他滨诱导细胞凋亡 | 第19页 |
| 1.2.4.3 MTT法检测细胞耐药逆转倍数 | 第19页 |
| 1.2.5 western blot检测转染前后RRM2蛋白表达情况 | 第19-21页 |
| 1.2.5.1 蛋白样品制备 | 第19-20页 |
| 1.2.5.2 SDS-PAGE电泳 | 第20-21页 |
| 1.2.5.3 抗原抗体反应 | 第21页 |
| 1.2.5.4 曝光照片 | 第21页 |
| 1.2.5.5 灰度值比较 | 第21页 |
| 1.2.6 流式细胞术检测转染前后细胞凋亡及周期 | 第21-23页 |
| 1.2.6.1 细胞转染 | 第21-22页 |
| 1.2.6.2 顺铂及吉西他滨诱导细胞凋亡 | 第22页 |
| 1.2.6.3 细胞凋亡检测 | 第22页 |
| 1.2.6.4 细胞周期检测 | 第22-23页 |
| 1.3 统计学方法 | 第23-24页 |
| 第2章 结果 | 第24-36页 |
| 2.1 耐药细胞诱导 | 第24-25页 |
| 2.1.1 细胞形态观察 | 第24页 |
| 2.1.2 SKOV3/cDDP耐药指数 | 第24-25页 |
| 2.2 使用荧光标记的siRNA确定转染最佳条件 | 第25-26页 |
| 2.3 筛选最佳的siRNA-RRM2-X | 第26-27页 |
| 2.4 MTT法检测RNAi对SKOV3/cDDP细胞的耐药逆转作用 | 第27-29页 |
| 2.5 siRNA转染后RRM2蛋白的表达水平 | 第29-30页 |
| 2.6 RRM2基因的表达水平与药物敏感性的关系 | 第30-31页 |
| 2.7 靶向RRM2的RNAi后对卵巢癌细胞凋亡和周期的影响 | 第31-36页 |
| 2.7.1 RRM2沉默后联合不同化疗药物对卵巢癌细胞凋亡的影响 | 第31-35页 |
| 2.7.2 靶向RRM2的RNAi后对卵巢癌细胞周期的影响 | 第35-36页 |
| 第3章 讨论 | 第36-43页 |
| 3.1 RRM2在恶性肿瘤中的表达及意义 | 第37页 |
| 3.2 吉西他滨与RRM2 | 第37-38页 |
| 3.3 RRM2在卵巢癌细胞中的表达 | 第38页 |
| 3.4 siRNA干扰技术在卵巢癌耐药机制中的应用 | 第38-41页 |
| 3.4.1 siRNA干扰的机制及特点 | 第38-39页 |
| 3.4.2 siRNA转染载体的选择 | 第39-40页 |
| 3.4.3 siRNA干扰在卵巢癌耐药应用中存在的问题 | 第40-41页 |
| 3.5 MTT法检测肿瘤细胞的药物敏感性 | 第41-42页 |
| 3.6 RRM2与卵巢癌细胞凋亡及周期的关系 | 第42-43页 |
| 3.6.1 RRM2低表达可增加化疗药物诱导的肿瘤细胞凋亡 | 第42页 |
| 3.6.2 RRM2与细胞周期 | 第42-43页 |
| 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 综述 | 第47-59页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
