| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词和术语表 | 第10-11页 |
| 目录 | 第11-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-24页 |
| 1.1 纳他霉素概述 | 第14-15页 |
| 1.1.1 纳他霉素的特性 | 第14页 |
| 1.1.2 纳他霉素的应用 | 第14-15页 |
| 1.2 纳他霉素生物合成研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3 链霉菌次级代谢调控研究进展 | 第16-21页 |
| 1.3.1 全局性调控 | 第16-17页 |
| 1.3.2 多效性调控 | 第17-18页 |
| 1.3.3 途径特异性调控 | 第18-21页 |
| 1.4 微生物胆固醇氧化酶的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.4.1 胆固醇氧化酶的催化机理 | 第21-22页 |
| 1.4.2 微生物中胆固醇氧化酶的生物学作用 | 第22页 |
| 1.5 本实验研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 途径特异性调控因子ScnRII的调控机制研究 | 第24-37页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.2.1 菌株或者质粒 | 第24-25页 |
| 2.2.2 引物列表 | 第25页 |
| 2.2.3 主要仪器与设备 | 第25-26页 |
| 2.2.4 培养基及培养条件 | 第26-27页 |
| 2.2.5 常用试剂 | 第27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-31页 |
| 2.3.1 PCR | 第27-28页 |
| 2.3.2 大肠杆菌质粒抽提 | 第28-29页 |
| 2.3.3 核酸片段割胶回收 | 第29页 |
| 2.3.4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 2.3.5 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第29页 |
| 2.3.6 大肠杆菌重组蛋白表达 | 第29页 |
| 2.3.7 大肠杆菌重组蛋白纯化 | 第29-30页 |
| 2.3.8 凝胶阻滞电泳(EMSA) | 第30-31页 |
| 2.4 结果 | 第31-35页 |
| 2.4.1 表达载体pGEX-2T-scnRII的构建 | 第31页 |
| 2.4.2 ScnRII蛋白的表达纯化 | 第31-32页 |
| 2.4.3 ScnRII与纳他霉素生物合成基因簇上特定基因的启动子区域结合 | 第32-34页 |
| 2.4.4 ScnRII中PAS结构域对ScnRII结合启动子能力的影响 | 第34-35页 |
| 2.5 本章小结及讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 途径特异性调控因子ScnRI的调控机制研究 | 第37-62页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料 | 第37-41页 |
| 3.2.1 菌株或者质粒 | 第37-38页 |
| 3.2.2 引物列表 | 第38-39页 |
| 3.2.3 主要仪器与设备 | 第39-40页 |
| 3.2.4 培养基及培养条件 | 第40页 |
| 3.2.5 常用试剂 | 第40-41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-48页 |
| 3.3.1 PCR | 第41页 |
| 3.3.2 大肠杆菌质粒抽提 | 第41页 |
| 3.3.3 核酸片段割胶回收 | 第41页 |
| 3.3.4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第41页 |
| 3.3.5 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第41页 |
| 3.3.6 大肠杆菌重组蛋白表达 | 第41页 |
| 3.3.7 大肠杆菌重组蛋白纯化 | 第41-42页 |
| 3.3.8 凝胶阻滞电泳(EMSA) | 第42页 |
| 3.3.9 RNA提取 | 第42-43页 |
| 3.3.10 反转录 | 第43页 |
| 3.3.11 Real-time PCR | 第43-44页 |
| 3.3.12 链霉菌基因组抽提 | 第44页 |
| 3.3.13 恰塔努加链霉菌孢子悬液的制备 | 第44页 |
| 3.3.14 发酵液中纳他霉素含量测定 | 第44-45页 |
| 3.3.15 定点突变 | 第45-46页 |
| 3.3.16 ATP酶活测定 | 第46-48页 |
| 3.4 结果 | 第48-60页 |
| 3.4.1 ScnRI的结构域分析 | 第48页 |
| 3.4.2 scnRI回补菌株的构建 | 第48-50页 |
| 3.4.3 scnRI缺失株中纳他霉素基因簇转录水平分析 | 第50-52页 |
| 3.4.4 表达载体pGEX-2T-scnRI与pGEX-2T-scnRI~(DBD)的构建 | 第52-54页 |
| 3.4.5 蛋白的表达纯化 | 第54-55页 |
| 3.4.6 ScnRI不能直接与纳他霉素合成基因的启动子区域结合 | 第55-56页 |
| 3.4.7 ScnRI与scnRI-scnRII基因间隔区的结合 | 第56-57页 |
| 3.4.8 ScnRI对途径特异性调控基因scnRII的正调控 | 第57-58页 |
| 3.4.9 ScnRI蛋白体外ATP酶活测定 | 第58页 |
| 3.4.10 ScnRI定点突变以及体内回补 | 第58-60页 |
| 3.5 本章小结及讨论 | 第60-62页 |
| 第四章 ScnE与ScnRI、ScnRII的协同调控机制初探 | 第62-76页 |
| 4.1 引言 | 第62页 |
| 4.2 实验材料 | 第62-65页 |
| 4.2.1 菌株或者质粒 | 第62-63页 |
| 4.2.2 引物列表 | 第63页 |
| 4.2.3 主要仪器与设备 | 第63-64页 |
| 4.2.4 培养基及培养条件 | 第64页 |
| 4.2.5 常用试剂 | 第64-65页 |
| 4.3 实验方法 | 第65-69页 |
| 4.3.1 PCR | 第65页 |
| 4.3.2 大肠杆菌质粒抽提 | 第65页 |
| 4.3.3 核酸片段割胶回收 | 第65页 |
| 4.3.4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第65页 |
| 4.3.5 PCR Targeting敲除技术 | 第65-68页 |
| 4.3.6 Southern blot | 第68-69页 |
| 4.4 结果 | 第69-75页 |
| 4.4.1 scnE缺失株的构建 | 第69页 |
| 4.4.2 scnE缺失株的验证 | 第69-70页 |
| 4.4.3 scnE信号肽预测 | 第70-71页 |
| 4.4.4 scnE信号肽切除的回补菌株构建 | 第71-72页 |
| 4.4.5 scnE缺失株纳他霉素的测定 | 第72-73页 |
| 4.4.6 途径特异性调控基因scnRI与scnRII对scnE的调控 | 第73-75页 |
| 4.5 本章小结及讨论 | 第75-76页 |
| 第五章 结论与展望 | 第76-78页 |
| 5.1 本文结论 | 第76页 |
| 5.2 展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-81页 |
| 攻读硕士学位期间的主要研究成果 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
