| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-19页 |
| 1.1 17β-羟基类固醇脱氢酶8和羰基还原酶 4 | 第12-16页 |
| 1.1.1 短链脱氢酶/还原酶 | 第13-15页 |
| 1.1.2 HsCBR4酶的介绍 | 第15页 |
| 1.1.3 Hs17β-HSD8酶的介绍 | 第15-16页 |
| 1.2 HsKAR酶的相关研究 | 第16-17页 |
| 1.2.1 HsKAR酶的晶体结构 | 第16页 |
| 1.2.2 Hs17β-HSD8和Hs CBR4共表达提纯 | 第16-17页 |
| 1.2.3 HsKAR酶的酶活研究 | 第17页 |
| 1.2.4 HsKAR在酵母体系的研究 | 第17页 |
| 1.2.5 HsKAR酶的定位 | 第17页 |
| 1.3 本文选题思路 | 第17-19页 |
| 第二章 Hs17β-HSD8和HsCBR4蛋白的表达和提纯 | 第19-36页 |
| 2.1 引言 | 第19-20页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第20-26页 |
| 2.2.1 实验所用试剂 | 第20-21页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第21页 |
| 2.2.3 培养基与缓冲溶液 | 第21-24页 |
| 2.2.4 质粒来源 | 第24页 |
| 2.2.5 菌株和感受态 | 第24-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-30页 |
| 2.3.1 质粒的提取 | 第26页 |
| 2.3.2 表达系统的构建 | 第26-27页 |
| 2.3.3 在 37 ℃条件下表达His_6-Hs CBR4蛋白 | 第27-28页 |
| 2.3.4 不同温度下表达His_6-HsCBR4蛋白 | 第28页 |
| 2.3.5 His_6-Hs CBR4和不同伴侣蛋白共表达 | 第28-29页 |
| 2.3.6 His_6-Hs CBR4和伴侣蛋白gro ES-groEL共表达提纯 | 第29页 |
| 2.3.7 在 37 ℃条件下表达His_6-Hs17β-Hs D8蛋白 | 第29-30页 |
| 2.3.8 His_6-Hs CBR4和伴侣蛋白gro ES-groEL共表达提纯 | 第30页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第30-35页 |
| 2.4.1 37 ℃条件下His_6-Hs CBR4蛋白表达提纯的结果 | 第30-31页 |
| 2.4.2 表达温度对His_6-HsCBR4蛋白可溶性含量的影响 | 第31-32页 |
| 2.4.3 伴侣蛋白对His_6-HsCBR4可溶性含量的影响 | 第32-33页 |
| 2.4.4 His_6-Hs CBR4和伴侣蛋白groES-groEL共表达提纯的结果 | 第33-34页 |
| 2.4.5 37 ℃条件下His_6-Hs17β-HSD8蛋白表达提纯的结果 | 第34页 |
| 2.4.6 His_6-Hs17β-HSD8和伴侣蛋白groES-groEL共表达提纯的结果 | 第34-35页 |
| 2.5 本章小结 | 第35-36页 |
| 第三章 HsCBR4和Hs17β-HSD8蛋白体外自组装的研究 | 第36-48页 |
| 3.1 引言 | 第36-37页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第37-38页 |
| 3.2.1 实验所用试剂 | 第37页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第37页 |
| 3.2.3 缓冲溶液 | 第37-38页 |
| 3.2.4 质粒来源 | 第38页 |
| 3.3 实验方法 | 第38-42页 |
| 3.3.1 HsCBR4酶活性的测定 | 第38-39页 |
| 3.3.2 Hs17β-HSD8酶活性的测定 | 第39页 |
| 3.3.3 HsCBR4和Hs17β-HSD8蛋白体外自组装 | 第39-40页 |
| 3.3.4 利用共提纯的方式研究HsCBR4和Hs17β-HSD8蛋白相互作用 | 第40-42页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第42-47页 |
| 3.4.1 酶活测定 | 第42页 |
| 3.4.2 His_6-Hs CBR4和Hs17β-HSD8蛋白体外自组装 | 第42-44页 |
| 3.4.3 共提纯方案一 | 第44-46页 |
| 3.4.4 共提纯方案二 | 第46-47页 |
| 3.5 本章小结 | 第47-48页 |
| 第四章 Hs17β-HSD8和HsCBR4在细胞内的双分子荧光互补实验 | 第48-56页 |
| 4.1 引言 | 第48-49页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第49-50页 |
| 4.2.1 实验材料及试剂 | 第49页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第49-50页 |
| 4.3 实验方法 | 第50-53页 |
| 4.3.1 质粒构建 | 第50-52页 |
| 4.3.2 质粒共转化 | 第52-53页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第53-55页 |
| 4.5.1 质粒构建 | 第53-54页 |
| 4.5.2 双分子荧光互补实验结果 | 第54-55页 |
| 4.5 本章小结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-66页 |
| 作者简历 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
