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中国野生葡萄编码NB-ARC结构的抗白粉病基因克隆及功能分析

摘要第5-7页
ABSTRACT第7-8页
第一章 文献综述第13-27页
    1.1 葡萄和葡萄白粉病第13-15页
        1.1.1 葡萄白粉菌的寄主第13页
        1.1.2 葡萄白粉菌生活史及发病症状第13-14页
        1.1.3 中国野生葡萄资源及抗性品质的利用第14页
        1.1.4 葡萄白粉病的分子机制及研究进展第14-15页
    1.2 植物免疫系统的概述第15-16页
    1.3 植物抗病蛋白识别病原菌无毒基因的分子机制第16-20页
        1.3.1 基因对基因假说第16页
        1.3.2 警戒模型第16-17页
        1.3.3 配体模型第17-18页
        1.3.4 诱饵模型第18-19页
        1.3.5 诱饵开关模型第19-20页
    1.4 植物抗病蛋白类型第20-26页
        1.4.1 NB-LRR蛋白第20-21页
        1.4.2 NB-ARC结构域第21-22页
        1.4.3 TIR结构域第22-23页
        1.4.4 CC结构域第23页
        1.4.5 LRR结构域的结构和功能第23-24页
        1.4.6 R蛋白的激活和调节第24-26页
    1.5 目的和意义第26-27页
第二章 中国野生华东葡萄VpCN基因克隆及功能分析第27-57页
    前言第27页
    2.1 材料第27-29页
        2.1.1 植物材料第27页
        2.1.2 主要仪器设备第27-28页
        2.1.3 主要试剂第28页
        2.1.4 引物第28-29页
    2.2 方法第29-33页
        2.2.1 材料处理第29页
        2.2.2 VpCN克隆和序列分析第29-30页
        2.2.3 VpCN表达分析第30页
        2.2.4 VpCN过表达载体构建和转化拟南芥第30页
        2.2.5 拟南芥台盼蓝染色第30页
        2.2.6 拟南芥NBT染色第30页
        2.2.7 拟南芥细菌菌落数计数第30-31页
        2.2.8 拟南芥H2O2含量测定第31页
        2.2.9 拟南芥死细胞含量测定第31页
        2.2.10 拟南芥胼胝质观察及含量测定第31页
        2.2.11 VpCN启动子瞬时转化及GUS染色第31-32页
        2.2.12 样品蛋白含量测定及蛋白标准曲线绘制第32页
        2.2.13 样品酶促反应和GUS荧光定量分析第32-33页
    2.3 结果分析第33-53页
        2.3.1 VpCN克隆及生物信息学分析第33-38页
        2.3.2 VpCN对病原菌的响应第38-39页
        2.3.3 VpCN基因转拟南芥植株的获得第39页
        2.3.4 VpCN转基因植株的表型分析第39-41页
        2.3.5 VpCN转基因拟南芥对拟南芥白粉病的抗性分析第41-42页
        2.3.6 VpCN转基因拟南芥对Pst DC3000的抗性分析第42-47页
        2.3.7 pVpCN启动子克隆及生物信息学分析第47-49页
        2.3.8 蛋白标准曲线的绘制第49页
        2.3.9 4-MU标准曲线绘制第49-50页
        2.3.10 pVpCN启动子瞬时转化载体的构建及GUS染色第50-51页
        2.3.11 pVpCN启动子不同区段的对白粉菌诱导表达特性分析第51-53页
    2.4 讨论第53-57页
第三章 中国野生华东葡萄VpTNL1基因克隆及功能研究第57-81页
    前言第57页
    3.1 材料与方法第57-58页
        3.1.1 材料第57-58页
        3.1.2 仪器设备和试剂第58页
    3.2 方法第58-59页
        3.2.1 材料处理及RNA提取与反转录第58页
        3.2.2 基因克隆及生物信息学研究第58页
        3.2.3 VpTNL1表达分析第58页
        3.2.4 载体构建及拟南芥转化第58页
        3.2.5 拟南芥抗病性鉴定第58页
        3.2.6 VpTNL1启动子克隆及瞬时表达载体构建第58页
        3.2.7 启动子瞬时转化及启动子活性鉴定第58页
        3.2.8 烟草转基因第58-59页
        3.2.9 转基因烟草白粉病接种和检测第59页
    3.3 结果分析第59-78页
        3.3.1 中国野生葡萄白河351VpTNL1表达分析第59-60页
        3.3.2 VpTNL1基因克隆及生物信息学分析第60-65页
        3.3.3 VpTNL1过表达载体构建及转化拟南芥第65-66页
        3.3.4 转VpTNL1基因烟草对烟草白粉病的抗性分析第66-67页
        3.3.5 转基因拟南芥对拟南芥白粉病的抗性分析第67-69页
        3.3.6 转基因拟南芥对Pst DC3000的抗性分析第69-71页
        3.3.7 VpTNL1启动子克隆及生物信息学分析第71-73页
        3.3.8 VpTNL1瞬时表达载体构建及GUS染色第73-78页
    3.4 讨论第78-81页
第四章 中国野生葡萄VqTNL2克隆及启动子克隆和功能验证第81-95页
    前言第81页
    4.1 材料方法第81-82页
        4.1.1 葡萄材料第81页
        4.1.2 主要仪器设备第81页
        4.1.3 主要试剂第81页
        4.1.4 载体与菌株第81页
        4.1.5 材料处理第81-82页
        4.1.6 葡萄RNA提取纯化及反转录反应第82页
        4.1.7 VqTNL2表达分析第82页
        4.1.8 VqTNL2基因克隆及生物信息学分析第82页
        4.1.9 VqTNL2启动子克隆及生物信息学分析第82页
        4.1.10 启动子瞬时表达载体构建及GUS染色第82页
    4.2 结果与分析第82-93页
        4.2.1 VqTNL2在葡萄器官中的表达第82-83页
        4.2.2 VqTNL2在白粉病病原菌侵染、SA和JA处理后的表达分析第83-84页
        4.2.3 VqTNL2基因克隆及生物信息学分析第84-90页
        4.2.4 中国野生毛葡萄商-24 VqTNL2启动子克隆第90-91页
        4.2.5 pVqTNL2瞬时表达载体的构建第91-92页
        4.2.6 pVqTNL2瞬时表达和GUS染色第92-93页
    4.3 讨论第93-95页
第五章 中国野生葡萄RPM1类基因克隆表达及生物信息学分析第95-107页
    前言第95-96页
    5.1 材料第96页
        5.1.1 葡萄材料第96页
        5.1.2 主要仪器设备第96页
        5.1.3 主要试剂第96页
    5.2 方法第96-97页
        5.2.1 葡萄白粉病接种处理第96页
        5.2.2 中国野生葡萄RPM1基因表达分析第96页
        5.2.3 基因克隆第96-97页
        5.2.4 生物信息学分析第97页
    5.3 结果分析第97-105页
        5.3.1 RPM1基因表达分析第97-98页
        5.3.2 中国野生葡萄RPM1类基因克隆第98-100页
        5.3.3 中国野生葡萄RPM1基因生物信息学分析第100-102页
        5.3.4 葡萄RPM1类基因生物信息学分析第102-105页
    5.4 讨论第105-106页
    问题与展望第106-107页
第六章 结论与创新点第107-108页
    6.1 结论第107页
    6.2 创新点第107-108页
参考文献第108-117页
附录第117-142页
致谢第142-143页
作者简介第143页

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