| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 英文缩略语注释表 | 第18-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-31页 |
| 1.1 肝星状细胞与肝纤维化 | 第20-21页 |
| 1.2 肝星状细胞的生物学特性 | 第21-22页 |
| 1.3 肝星状细胞与血管新生 | 第22-25页 |
| 1.3.1 低氧诱导因子 | 第23-24页 |
| 1.3.2 血管内皮细胞生长因子 | 第24页 |
| 1.3.3 转化生长因子β1 | 第24页 |
| 1.3.4 结缔组织生长因子 | 第24-25页 |
| 1.3.5 血管生成素 | 第25页 |
| 1.3.6 整合素avβ3 | 第25页 |
| 1.4 细胞活化与血管生成 | 第25-26页 |
| 1.4.1 肝窦内皮细胞活化 | 第25-26页 |
| 1.4.2 肝星状细胞活化 | 第26页 |
| 1.4.3 枯否细胞和炎性细胞活化 | 第26页 |
| 1.5 Frizzled-4受体与WNT/β-catenin信号通路 | 第26-28页 |
| 1.6 龙血素 | 第28页 |
| 1.7 本研究是意义 | 第28-29页 |
| 1.8 实验技术路线图 | 第29-31页 |
| 1.8.1 细胞实验技术路线 | 第29-30页 |
| 1.8.2 动物实验技术路线 | 第30-31页 |
| 第二章 大鼠HSC的分离、培养、鉴定和诱导活化 | 第31-44页 |
| 2.1 引言 | 第31-32页 |
| 2.2 材料与方法 | 第32-38页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第32页 |
| 2.2.2 主要实验药品及试剂 | 第32-33页 |
| 2.2.3 主要实验仪器 | 第33页 |
| 2.2.4 大鼠HSC的分离步骤 | 第33-37页 |
| 2.2.5 HSC得率和活率计算、传代培养、冻存与复苏 | 第37页 |
| 2.2.6 HSC的鉴定 | 第37-38页 |
| 2.3 实验结果 | 第38-40页 |
| 2.3.1 静止HSC | 第38页 |
| 2.3.2 原代肝星状细胞与细胞株的形态比较 | 第38-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-43页 |
| 2.5 本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章: 龙血素和美洲大蠊浸膏对肝星状细胞增殖的影响 | 第44-55页 |
| 3.1 引言 | 第44-45页 |
| 3.2 材料与设备 | 第45-46页 |
| 3.2.1 主要实验材料 | 第45页 |
| 3.2.2 主要实验试剂 | 第45页 |
| 3.2.3 主要实验仪器 | 第45-46页 |
| 3.3 实验方法 | 第46-48页 |
| 3.3.1 细胞的复苏 | 第46页 |
| 3.3.2 细胞传代 | 第46页 |
| 3.3.3 细胞冻存 | 第46-47页 |
| 3.3.4 龙血素稀释溶剂的选用 | 第47页 |
| 3.3.5 MTT法检测肝星状细胞增殖 | 第47-48页 |
| 3.4 实验结果 | 第48-52页 |
| 3.4.1 乙醇对HSC-T6毒性较甲醇和DMSO低 | 第48页 |
| 3.4.2 龙血素A抑制HSC-T6的增殖 | 第48-50页 |
| 3.4.3 龙血素B抑制HSC-T6的增殖 | 第50-51页 |
| 3.4.4 美洲大蠊浸膏抑制HSC-T6的增殖 | 第51-52页 |
| 3.5 讨论 | 第52-54页 |
| 3.6 本章小结 | 第54-55页 |
| 第四章 龙血素对肝星状细胞活化相关细胞因子的影响 | 第55-62页 |
| 4.1 引言 | 第55页 |
| 4.2 材料与设备 | 第55-56页 |
| 4.2.1 主要实验材料 | 第55页 |
| 4.2.2 主要实验试剂 | 第55-56页 |
| 4.2.3 主要实验仪器 | 第56页 |
| 4.3 实验方法 | 第56-58页 |
| 4.3.1 ELISA检验原理 | 第56-57页 |
| 4.3.2 试剂盒组成 | 第57页 |
| 4.3.3 酶联免疫吸附检测 | 第57-58页 |
| 4.4 实验结果 | 第58-59页 |
| 4.4.1 龙血素A抑制α-SMA、TGF-β1和VEGF的合成与分泌 | 第58页 |
| 4.4.2 龙血素B抑制α-SMA、TGF-β1和VEGF的合成与分泌 | 第58-59页 |
| 4.5 讨论 | 第59-60页 |
| 4.6 本章小结 | 第60-62页 |
| 第五章: WNT/β-catenin信号通路细胞膜受体蛋白Frizzled-4的表达及龙血素干预的影响 | 第62-74页 |
| 5.1 引言 | 第62页 |
| 5.2 材料与设备 | 第62-64页 |
| 5.2.1 主要实验材料 | 第62页 |
| 5.2.2 主要实验试剂 | 第62-64页 |
| 5.2.3 主要实验仪器 | 第64页 |
| 5.3 Western Blot实验方法 | 第64-67页 |
| 5.3.1 提取细胞总蛋白 | 第64-65页 |
| 5.3.2 BCA法蛋白定量及蛋白变性 | 第65页 |
| 5.3.3 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第65-66页 |
| 5.3.4 转膜 | 第66-67页 |
| 5.3.5 免疫反应 | 第67页 |
| 5.4 实验结果 | 第67-71页 |
| 5.4.1 龙血素A抑制Frizzled-4受体蛋白表达 | 第67-68页 |
| 5.4.2 龙血素B抑制Frizzled-4和Norrin蛋白表达 | 第68-70页 |
| 5.4.3 龙血素B抑制α-SMA蛋白表达 | 第70-71页 |
| 5.5 讨论 | 第71-73页 |
| 5.6 本章小结 | 第73-74页 |
| 第六章: Frizzled-4基因表达及龙血素B干预的调控机制 | 第74-86页 |
| 6.1 引言 | 第74-75页 |
| 6.2 材料与设备 | 第75-77页 |
| 6.2.1 主要实验材料 | 第75页 |
| 6.2.2 主要实验试剂 | 第75-76页 |
| 6.2.3 主要实验仪器 | 第76页 |
| 6.2.4 引物设计 | 第76-77页 |
| 6.3 RT-PCR主要步骤 | 第77-80页 |
| 6.3.1 细胞总RNA提取 | 第77-78页 |
| 6.3.2 RNA样品浓度测定 | 第78页 |
| 6.3.3 第一链cDNA合成 | 第78-79页 |
| 6.3.4 荧光实时定量PCR(Real Time PCR) | 第79-80页 |
| 6.4 RT-PCR实验结果 | 第80-84页 |
| 6.4.1 扩增曲线与溶解曲线 | 第80-83页 |
| 6.4.2 RT-PCR分析Frizzled-4、α-SMA和Ang-1在mRNA水平的表 | 第83-84页 |
| 6.5 讨论 | 第84-85页 |
| 6.6 本章小结 | 第85-86页 |
| 第七章: Norrin/Frizzled-4信号在硫代乙酰胺诱导的大鼠急性肝损伤中的时序表达 | 第86-96页 |
| 7.1 引言 | 第86页 |
| 7.2 材料与设备 | 第86-88页 |
| 7.2.1 主要实验材料 | 第86-87页 |
| 7.2.2 主要实验试剂 | 第87页 |
| 7.2.3 主要实验仪器 | 第87-88页 |
| 7.3 试验方法及步骤 | 第88-90页 |
| 7.3.1 急性肝损伤动物模型制备 | 第88页 |
| 7.3.2 ELISA检测血清中CD105、VEGF含量 | 第88-89页 |
| 7.3.3 肝组织病理学检查 | 第89页 |
| 7.3.4 Western Blot检测肝组织中Norrin和Frizzled-4蛋白表达 | 第89页 |
| 7.3.5 统计学处理 | 第89-90页 |
| 7.4 实验结果 | 第90-94页 |
| 7.4.1 大鼠生长情况 | 第90页 |
| 7.4.2 大鼠体重变化 | 第90页 |
| 7.4.3 血清中CD105和VEGF含量 | 第90-91页 |
| 7.4.4 HE染色检测结果 | 第91页 |
| 7.4.5 Western Blot检测结果 | 第91-94页 |
| 7.5 讨论 | 第94-95页 |
| 7.6 本章小结 | 第95-96页 |
| 后续研究 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-106页 |
| 附录一: 综述 | 第106-113页 |
| 参考文献 | 第110-113页 |
| 附录二: 攻读研究生期间发表论文情况 | 第113-114页 |
| 附录三: 其他要说明的内容 | 第114页 |
