| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第12-28页 |
| 1.1 肿瘤的治疗方式 | 第13-16页 |
| 1.1.1 手术治疗 | 第13页 |
| 1.1.2 放射治疗 | 第13-14页 |
| 1.1.3 药物治疗 | 第14-15页 |
| 1.1.4 免疫治疗 | 第15页 |
| 1.1.5 其它方式治疗 | 第15-16页 |
| 1.2 抗肿瘤多肽的研究进展 | 第16-20页 |
| 1.2.1 抗肿瘤多肽的来源 | 第16-18页 |
| 1.2.2 抗肿瘤多肽的作用机制 | 第18-20页 |
| 1.3 海洋蛋白酶的来源 | 第20-21页 |
| 1.3.1 来源于海洋动物的蛋白酶 | 第21页 |
| 1.3.2 来源于海洋植物的蛋白酶 | 第21页 |
| 1.3.3 来源于海洋微生物的蛋白酶 | 第21页 |
| 1.4 海洋蛋白酶的应用 | 第21-24页 |
| 1.4.1 工业生产中的应用 | 第22页 |
| 1.4.2 农业生产中的应用 | 第22-23页 |
| 1.4.3 医药保健领域的应用 | 第23页 |
| 1.4.4 海洋防污领域的应用 | 第23-24页 |
| 1.4.5 其它应用 | 第24页 |
| 1.5 多肽基因的重组表达研究进展 | 第24-25页 |
| 1.5.1 多肽基因在原核生物中的克隆表达 | 第24-25页 |
| 1.5.2 多肽基因在真核生物中的克隆表达 | 第25页 |
| 1.6 选题背景及课题研究内容 | 第25-28页 |
| 第二章 抗肿瘤多肽PBN11-8 基因的克隆及其酶学性质研究 | 第28-46页 |
| 2.1 前言 | 第28页 |
| 2.2 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.2.1 实验菌种 | 第28页 |
| 2.2.2 实验材料和试剂 | 第28-29页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-35页 |
| 2.3.1 实验相关溶液的配制 | 第30页 |
| 2.3.2 菌株的培养 | 第30页 |
| 2.3.3 菌株N11-8 基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.3.4 PCR合成编码PBN11-8 的基因 | 第31-32页 |
| 2.3.5 多肽PBN11-8 浓度的测定 | 第32-33页 |
| 2.3.6 福林-酚法测定PBN11-8 蛋白酶酶活力 | 第33-34页 |
| 2.3.7 EDTA对PBN11-8 蛋白酶酶活力的影响 | 第34页 |
| 2.3.8 PBN11-8 蛋白酶的最适温度和最适pH测定 | 第34页 |
| 2.3.9 PBN11-8 蛋白酶的热稳定性和pH稳定性试验 | 第34页 |
| 2.3.10 PBN11-8 蛋白酶的金属离子稳定性 | 第34-35页 |
| 2.4 结果与分析 | 第35-43页 |
| 2.4.1 菌株N11-8 基因组DNA琼脂糖电泳结果 | 第35页 |
| 2.4.2 编码PBN11-8 的基因克隆结果 | 第35-36页 |
| 2.4.3 PBN11-8 的基因序列 | 第36-37页 |
| 2.4.4 多肽PBN11-8 的浓度 | 第37-38页 |
| 2.4.5 福林-酚法测定PBN11-8 蛋白酶酶活力 | 第38-39页 |
| 2.4.6 EDTA对PBN11-8 蛋白酶酶活力的影响 | 第39-40页 |
| 2.4.7 PBN11-8 蛋白酶的最适温度和最适pH | 第40-41页 |
| 2.4.8 PBN11-8 蛋白酶的热稳定性和pH稳定性 | 第41-42页 |
| 2.4.9 PBN11-8 蛋白酶的金属离子稳定性 | 第42-43页 |
| 2.5 本章小结 | 第43-46页 |
| 第三章 抗肿瘤多肽PBN11-8 的克隆表达 | 第46-62页 |
| 3.1 前言 | 第46页 |
| 3.2 实验材料 | 第46-48页 |
| 3.2.1 实验菌种 | 第46页 |
| 3.2.2 实验材料和试剂 | 第46-47页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第47-48页 |
| 3.3 实验方法 | 第48-55页 |
| 3.3.1 实验相关溶液的配制 | 第48-49页 |
| 3.3.2 PET22b+质粒的提取 | 第49-50页 |
| 3.3.3 PCR法合成带酶切位点的编码PBN11-8 的基因 | 第50-51页 |
| 3.3.4 重组质粒的构建 | 第51-53页 |
| 3.3.5 重组质粒的转化 | 第53页 |
| 3.3.6 重组阳性克隆的筛选 | 第53-54页 |
| 3.3.7 阳性重组菌的诱导表达和鉴定 | 第54-55页 |
| 3.3.8 重组蛋白的分离纯化 | 第55页 |
| 3.4 结果与分析 | 第55-61页 |
| 3.4.1 重组菌株的抗性筛选结果 | 第55-56页 |
| 3.4.2 菌落PCR结果 | 第56-57页 |
| 3.4.3 质粒双酶切鉴定重组菌 | 第57页 |
| 3.4.4 阳性克隆的最终确定 | 第57-58页 |
| 3.4.5 重组菌的诱导表达结果 | 第58-59页 |
| 3.4.6 重组蛋白的分离纯化结果 | 第59-61页 |
| 3.5 本章小结 | 第61-62页 |
| 第四章 重组多肽PBN11-8 的抗肿瘤活性研究 | 第62-74页 |
| 4.1 前言 | 第62页 |
| 4.2 实验材料 | 第62-64页 |
| 4.2.1 实验细胞 | 第62页 |
| 4.2.2 实验材料和试剂 | 第62-63页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第63-64页 |
| 4.3 实验方法 | 第64-66页 |
| 4.3.1 实验相关溶液的配制 | 第64页 |
| 4.3.2 细胞的复苏 | 第64页 |
| 4.3.3 细胞的传代培养 | 第64-65页 |
| 4.3.4 细胞的冻存 | 第65页 |
| 4.3.5 MTT检测法 | 第65-66页 |
| 4.3.6 BEL-7402 细胞形态的观察 | 第66页 |
| 4.3.7 结晶紫粘附性实验 | 第66页 |
| 4.4 结果与分析 | 第66-71页 |
| 4.4.1 MTT法检测重组PBN11-8 对细胞的增殖抑制作用 | 第66-70页 |
| 4.4.2 重组多肽PBN11-8 对BEL-7402 细胞的形态影响 | 第70-71页 |
| 4.4.3 结晶紫实验测定重组PBN11-8 对细胞粘附性的影响 | 第71页 |
| 4.5 本章小结 | 第71-74页 |
| 第五章 重组PBN11-8 的蛋白酶酶活测定和酶学性质研究 | 第74-82页 |
| 5.1 前言 | 第74页 |
| 5.2 实验材料 | 第74-75页 |
| 5.2.1 实验材料和试剂 | 第74页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第74-75页 |
| 5.3 实验方法 | 第75-76页 |
| 5.3.1 实验相关溶液的配制 | 第75页 |
| 5.3.2 重组多肽浓度的测定 | 第75页 |
| 5.3.3 福林-酚法测定重组多肽蛋白酶酶活力 | 第75页 |
| 5.3.4 EDTA对重组多肽蛋白酶酶活力的影响 | 第75页 |
| 5.3.5 重组PBN11-8 蛋白酶的最适温度和最适pH测定 | 第75页 |
| 5.3.6 重组多肽的热稳定性和pH稳定性试验 | 第75-76页 |
| 5.3.7 重组多肽的金属离子稳定性 | 第76页 |
| 5.4 结果与分析 | 第76-79页 |
| 5.4.1 重组多肽PBN11-8 的浓度 | 第76页 |
| 5.4.2 福林-酚法测定重组PBN11-8 蛋白酶活力 | 第76页 |
| 5.4.3 EDTA对重组PBN11-8 蛋白酶的酶活力的影响 | 第76-77页 |
| 5.4.4 重组PBN11-8 蛋白酶的最适温度和最适pH | 第77-78页 |
| 5.4.5 重组PBN11-8 蛋白酶的热稳定性和pH稳定性 | 第78-79页 |
| 5.4.6 重组PBN11-8 蛋白酶的金属离子稳定性 | 第79页 |
| 5.5 本章小结 | 第79-82页 |
| 结论 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| 致谢 | 第90-92页 |
| 攻读学位期间发表学术论文目录 | 第92-94页 |
