摘要 | 第5-6页 |
abstract | 第6页 |
英文缩略表(Abbreviations) | 第11-12页 |
第一章 绪论 | 第12-17页 |
1.1 暖水鱼类营养需求概述 | 第12-13页 |
1.1.1 鱼油替代对暖水鱼生长的影响 | 第12页 |
1.1.2 高脂饲料对暖水鱼肝脏的影响 | 第12-13页 |
1.2 脂毒性概述 | 第13页 |
1.2.1 游离脂肪酸与脂毒性 | 第13页 |
1.2.2 脂毒性与代谢疾病 | 第13页 |
1.2.3 脂毒性与肝脏损伤 | 第13页 |
1.3 内质网应激概述 | 第13-15页 |
1.3.1 内质网应激反应 | 第14页 |
1.3.2 未折叠蛋白质应答反应 | 第14-15页 |
1.3.3 内质网应激与自噬激活 | 第15页 |
1.4 细胞凋亡概述 | 第15-16页 |
1.4.1 细胞死亡模式—凋亡与坏死 | 第15-16页 |
1.4.2 细胞凋亡的生理意义 | 第16页 |
1.5 研究背景及目的与意义 | 第16-17页 |
1.5.1 棕榈油在暖水鱼养殖中的应用 | 第16页 |
1.5.2 目的与意义 | 第16-17页 |
第二章 食源性棕榈酸诱导斑马鱼肝脏损伤和内质网应激 | 第17-30页 |
2.1 前言 | 第17页 |
2.2 材料 | 第17页 |
2.2.1 试验动物 | 第17页 |
2.2.2 主要试剂 | 第17页 |
2.2.3 主要仪器 | 第17页 |
2.3 方法 | 第17-22页 |
2.3.1 斑马鱼养殖与取样 | 第17-18页 |
2.3.2 气相色谱检测饲料与斑马鱼肝脏脂肪酸组成 | 第18-19页 |
2.3.3 免疫组化分析 | 第19页 |
2.3.4 谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)酶活检测 | 第19页 |
2.3.5 肝脏caspase-3 酶活检测 | 第19页 |
2.3.6 肝脏TAG水平定量 | 第19-20页 |
2.3.7 实时定量PCR检测基因的mRNA水平 | 第20-22页 |
2.3.8 数据分析 | 第22页 |
2.4 结果 | 第22-28页 |
2.4.1 食源性棕榈酸在肝脏中的积累情况 | 第22-25页 |
2.4.2 食源性棕榈酸诱导斑马鱼肝脏损伤 | 第25-26页 |
2.4.3 食源性棕榈酸诱导斑马鱼肝脏内质网应激 | 第26-27页 |
2.4.4 食源性棕榈酸激活斑马鱼肝脏自噬 | 第27-28页 |
2.4.5 食源性棕榈酸激活NF-κB和SREBP通路 | 第28页 |
2.5 讨论 | 第28-30页 |
第三章 棕榈酸诱导斑马鱼肝脏细胞凋亡与细胞周期阻滞 | 第30-39页 |
3.1 前言 | 第30页 |
3.2 材料 | 第30页 |
3.2.1 细胞株 | 第30页 |
3.2.2 主要试剂 | 第30页 |
3.2.3 主要仪器 | 第30页 |
3.3 方法 | 第30-32页 |
3.3.1 细胞培养 | 第30-31页 |
3.3.2 棕榈酸配制 | 第31页 |
3.3.3 RTCA实时监测细胞活性 | 第31页 |
3.3.4 Alarmablue法检测细胞存活率 | 第31页 |
3.3.5 流式细胞术检测细胞凋亡率 | 第31-32页 |
3.3.6 流式细胞术检测细胞周期 | 第32页 |
3.3.7 数据分析 | 第32页 |
3.4 结果 | 第32-37页 |
3.4.1 细胞形态学观察 | 第32-33页 |
3.4.2 细胞活性检测结果 | 第33-35页 |
3.4.3 棕榈酸对ZFL细胞凋亡的影响 | 第35-36页 |
3.4.4 棕榈酸对ZFL细胞周期的影响 | 第36-37页 |
3.5 讨论 | 第37-39页 |
第四章 内质网应激抑制剂对斑马鱼肝细胞脂毒性的影响 | 第39-48页 |
4.1 前言 | 第39页 |
4.2 材料 | 第39页 |
4.2.1 细胞株 | 第39页 |
4.2.2 主要试剂 | 第39页 |
4.2.3 主要仪器 | 第39页 |
4.3 方法 | 第39-41页 |
4.3.1 细胞培养 | 第39页 |
4.3.2 棕榈酸配制 | 第39页 |
4.3.3 实时定量PCR检测基因表达 | 第39-40页 |
4.3.4 内质网应激抑制剂配制 | 第40页 |
4.3.5 Alarmablue法检测抑制剂作用下的细胞存活情况 | 第40页 |
4.3.6 流式细胞术检测抑制剂作用下的细胞凋亡情况 | 第40页 |
4.3.7 基因敲降法验证PERK-CHOP通路对细胞凋亡的影响 | 第40-41页 |
4.3.8 数据分析 | 第41页 |
4.4 结果 | 第41-46页 |
4.4.1 棕榈酸孵育对ZFL细胞内质网应激感应蛋白和UPR通路基因mRNA水平的影响 | 第41-42页 |
4.4.2 棕榈酸诱导的凋亡与UPR通路的关系 | 第42-46页 |
4.5 讨论 | 第46-48页 |
第五章 内质网应激抑制剂对斑马鱼幼鱼棕榈酸脂毒性反应的影响 | 第48-54页 |
5.1 前言 | 第48页 |
5.2 材料 | 第48页 |
5.2.1 试验动物 | 第48页 |
5.2.2 主要试剂 | 第48页 |
5.2.3 主要仪器 | 第48页 |
5.3 方法 | 第48-50页 |
5.3.1 亲鱼繁殖 | 第48页 |
5.3.2 幼鱼养殖与取样 | 第48-49页 |
5.3.3 实时定量PCR检测内质网应激感应蛋白和通路基因的mRNA水平 | 第49页 |
5.3.4 内质网应激抑制剂配制 | 第49-50页 |
5.4 结果 | 第50-53页 |
5.4.1 食源性棕榈酸诱导斑马鱼幼鱼内质网应激 | 第50-51页 |
5.4.2 内质网应激抑制剂对棕榈酸脂毒性的影响 | 第51-53页 |
5.5 讨论 | 第53-54页 |
第六章 全文结论 | 第54-55页 |
参考文献 | 第55-66页 |
致谢 | 第66-67页 |
作者简历 | 第67页 |