| 致谢 | 第4-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| 缩略语词汇表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1 猪细小病毒病的研究 | 第12-14页 |
| 1.1 猪细小病毒病原学研究 | 第12-13页 |
| 1.1.1 猪细小病毒的形态和理化特性 | 第12页 |
| 1.1.2 猪细小病毒的生物型分类 | 第12页 |
| 1.1.3 猪细小病毒的培养 | 第12-13页 |
| 1.1.4 猪细小病毒的血凝性 | 第13页 |
| 1.1.5 猪细小病毒编码蛋白 | 第13页 |
| 1.1.5.1 猪细小病毒的结构蛋白 | 第13页 |
| 1.1.5.2 猪细小病毒非结构蛋白 | 第13页 |
| 1.2 猪细小病毒病检测方法的研究 | 第13-14页 |
| 1.2.1 病毒分离鉴定 | 第13页 |
| 1.2.2 血清学检测方法 | 第13-14页 |
| 1.2.2.1 血凝和血凝抑制试验 | 第13页 |
| 1.2.2.2 中和试验检测方法 | 第13-14页 |
| 1.2.2.3 酶联免疫吸附试验 | 第14页 |
| 1.2.3 分子生物学检测方法 | 第14页 |
| 1.2.3.1 PCR检测方法 | 第14页 |
| 1.2.3.2 荧光定量PCR检测方法 | 第14页 |
| 1.2.3.3 基因芯片检测方法 | 第14页 |
| 2 副猪嗜血杆菌病的研究 | 第14-17页 |
| 2.1 副猪嗜血杆菌病原学研究 | 第14-16页 |
| 2.1.1 副猪嗜血杆菌的病原学研究 | 第14-15页 |
| 2.1.2 副猪嗜血杆菌的形态学及培养特性 | 第15页 |
| 2.1.3 副猪嗜血杆菌的分型研究 | 第15页 |
| 2.1.4 副猪嗜血杆菌毒力相关因子 | 第15-16页 |
| 2.1.4.1 荚膜多糖 | 第15页 |
| 2.1.4.2 外膜蛋白 | 第15页 |
| 2.1.4.3 神经氨酸酶 | 第15-16页 |
| 2.1.5 副猪嗜血杆菌耐药性研究 | 第16页 |
| 2.1.5.1 副猪嗜血杆菌的药物敏感性研究 | 第16页 |
| 2.1.5.2 国内副猪嗜血杆菌的耐药谱 | 第16页 |
| 2.2 副猪嗜血杆菌检测方法研究 | 第16-17页 |
| 2.2.1 病原学检测技术 | 第16页 |
| 2.2.2 血清学检测技术 | 第16-17页 |
| 2.2.2.1 间接血凝试验 | 第16页 |
| 2.2.2.2 酶联免疫吸附试验 | 第16-17页 |
| 2.2.2.3 乳胶凝集试验 | 第17页 |
| 2.2.3 分子生物学检测技术 | 第17页 |
| 2.2.3.1 常规PCR方法 | 第17页 |
| 2.2.3.2 实时荧光定量PCR | 第17页 |
| 2.2.3.3 可视化LAMP检测方法 | 第17页 |
| 2.2.3.4 基因芯片检测技术 | 第17页 |
| 3 基因芯片技术的应用与发展 | 第17-20页 |
| 3.1 基因芯片的概述 | 第17-18页 |
| 3.1.1 基因芯片的概念 | 第17-18页 |
| 3.1.2 基因芯片的发展 | 第18页 |
| 3.2 基因芯片的技术环节 | 第18页 |
| 3.2.1 芯片的设计与制备 | 第18页 |
| 3.2.2 样品的制备与标记 | 第18页 |
| 3.2.3 基因芯片的杂交反应 | 第18页 |
| 3.2.4 信号扫描及结果分析 | 第18页 |
| 3.3 基因芯片技术的应用 | 第18-19页 |
| 3.3.1 基础研究中的应用 | 第18-19页 |
| 3.3.1.1 基因组测序 | 第18页 |
| 3.3.1.2 基因表达分析 | 第18页 |
| 3.3.1.3 寻找新基因 | 第18-19页 |
| 3.3.2 疾病防治中的应用 | 第19页 |
| 3.3.2.1 同步检测多种病原体 | 第19页 |
| 3.3.2.2 同步检测多个样品 | 第19页 |
| 3.3.2.3 耐药性检测 | 第19页 |
| 3.4 基因芯片技术存在的问题与展望 | 第19-20页 |
| 第二章 试验研究 | 第20-36页 |
| 试验一 PPV与Hps的培养及PCR条件的确立 | 第20-27页 |
| 引言 | 第20页 |
| 1 材料与方法 | 第20-23页 |
| 1.1 材料 | 第20-21页 |
| 1.1.1 病毒及菌株来源 | 第20页 |
| 1.1.2 细胞来源 | 第20页 |
| 1.1.3 基因提取试剂盒 | 第20-21页 |
| 1.1.4 主要试剂及培养基 | 第21页 |
| 1.1.5 主要仪器 | 第21页 |
| 1.2 方法 | 第21-23页 |
| 1.2.1 病毒与细菌的培养 | 第21页 |
| 1.2.1.1 猪细小病毒的培养 | 第21页 |
| 1.2.1.2 副猪嗜血杆菌的培养 | 第21页 |
| 1.2.2 基因组DNA的提取 | 第21-22页 |
| 1.2.2.1 猪细小病毒基因组DNA的提取 | 第21-22页 |
| 1.2.2.2 副猪嗜血杆菌基因组DNA的提取 | 第22页 |
| 1.2.3 引物的设计与合成 | 第22-23页 |
| 1.2.4 PCR反应体系与条件的确立 | 第23页 |
| 1.2.5 退火温度的优化 | 第23页 |
| 1.2.6 电泳条件的确立 | 第23页 |
| 1.2.7 特异性试验 | 第23页 |
| 1.2.8 重复性试验 | 第23页 |
| 2 结果与分析 | 第23-25页 |
| 2.1 培养结果 | 第23-24页 |
| 2.1.1 猪细小病毒培养结果与分析 | 第23-24页 |
| 2.1.2 副猪嗜血杆菌培养结果与分析 | 第24页 |
| 2.2 PPV与HPS特异性引物设计结果 | 第24页 |
| 2.3 PCR反应条件确立结果与分析 | 第24-25页 |
| 2.4 特异性试验结果与分析 | 第25页 |
| 2.5 重复性试验结果与分析 | 第25页 |
| 3 结论与讨论 | 第25-27页 |
| 3.1 讨论 | 第25-26页 |
| 3.1.1 病毒与细菌的培养 | 第25-26页 |
| 3.1.2 目的基因的选择 | 第26页 |
| 3.1.3 目的基因的引物设计 | 第26页 |
| 3.1.4 目的基因的扩增条件优化 | 第26页 |
| 3.2 结论 | 第26-27页 |
| 试验二PPV与Hps基因芯片同步检测技术试验研究 | 第27-36页 |
| 引言 | 第27页 |
| 1 材料与方法 | 第27-30页 |
| 1.1 材料 | 第27-28页 |
| 1.1.1 病毒及菌株来源 | 第27页 |
| 1.1.2 芯片材料 | 第27页 |
| 1.1.3 试验仪器 | 第27页 |
| 1.1.4 主要试剂和溶液 | 第27-28页 |
| 1.2 方法 | 第28-30页 |
| 1.2.1 引物及探针的设计与合成 | 第28页 |
| 1.2.2 基因芯片的制备 | 第28-29页 |
| 1.2.2.1 PPV与Hps基因芯片的制备 | 第28-29页 |
| 1.2.2.2 PPV与Hps同步检测基因芯片的制备 | 第29页 |
| 1.2.3 杂交用PCR产物的制备与鉴定 | 第29-30页 |
| 1.2.4 基因芯片的杂交 | 第30页 |
| 1.2.4.1 基因芯片杂交条件的研究 | 第30页 |
| 1.2.4.2 同步检测基因芯片杂交条件的研究 | 第30页 |
| 1.2.4.3 杂交条件优化试验 | 第30页 |
| 1.2.5 基因芯片的洗涤与干燥 | 第30页 |
| 1.2.6 基因芯片的扫描与保存 | 第30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-35页 |
| 2.1 不对称PCR扩增结果与分析 | 第30-31页 |
| 2.2 杂交条件优化的结果与分析 | 第31-33页 |
| 2.2.1 探针的长度 | 第31页 |
| 2.2.2 杂交湿度 | 第31-32页 |
| 2.2.3 PCR产物与杂交缓冲液的比例 | 第32页 |
| 2.2.4 杂交温度与时间 | 第32-33页 |
| 2.3 基因芯片杂交扫描结果与分析 | 第33-35页 |
| 2.3.1 PPV与Hps基因芯片扫描结果与分析 | 第33-34页 |
| 2.3.2 PPV与Hps同步检测基因芯片扫描结果与分析 | 第34-35页 |
| 3 结论与讨论 | 第35-36页 |
| 3.1 讨论 | 第35页 |
| 3.1.1 基因芯片技术 | 第35页 |
| 3.1.1.1 基因芯片检测技术 | 第35页 |
| 3.1.1.2 目的基因的标记和探针的修饰 | 第35页 |
| 3.1.1.3 基因芯片杂交结果判定 | 第35页 |
| 3.2 结论 | 第35-36页 |
| 3.2.1 PPV与Hps基因芯片同步检测的建立 | 第35页 |
| 3.2.2 不对称PCR的应用 | 第35页 |
| 3.2.3 探针固定的条件 | 第35页 |
| 3.2.4 重复性试验 | 第35-36页 |
| 3.2.5 稳定性试验 | 第36页 |
| 全文总结与创新点 | 第36-37页 |
| 全文总结 | 第36页 |
| 本研究的创新点 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-41页 |
| ABSTRACT | 第41-42页 |
| 附录 | 第43页 |