| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第13-41页 |
| 1.1 腈转化酶(nitrile-converting enzymes) | 第13-15页 |
| 1.2 酰胺酶(Amidase) | 第15-21页 |
| 1.2.1 酰胺酶的来源及性质 | 第15-17页 |
| 1.2.2 酰胺酶的分类 | 第17-18页 |
| 1.2.3 酰胺酶酶催化反应的作用机理 | 第18页 |
| 1.2.4 酰胺酶在手性中间体合成中的应用 | 第18-21页 |
| 1.3 西司他丁合成的关键中间体——S-(+)-2,2-二甲基环丙甲酰胺 | 第21-29页 |
| 1.3.1 手性二甲基环丙烷骨架是一类重要的生物活性分子结构单元 | 第21-22页 |
| 1.3.2 西司他丁及其用途 | 第22-23页 |
| 1.3.3 S-(+)-2,2-二甲基环丙烷甲酰胺的合成方法 | 第23-29页 |
| 1.4 本论文的研究内容 | 第29-31页 |
| 参考文献 | 第31-41页 |
| 第二章 基于酰基转移反应的立体选择性酰胺酶筛选模型的构建 | 第41-53页 |
| 2.1 引言 | 第41-43页 |
| 2.2 材料与方法 | 第43-45页 |
| 2.2.1 化学试剂与主要仪器 | 第43页 |
| 2.2.2 培养基 | 第43-44页 |
| 2.2.3 菌种的初筛 | 第44页 |
| 2.2.4 菌种的复筛 | 第44页 |
| 2.2.5 酰胺酶催化的酰基转移反应 | 第44页 |
| 2.2.6 酰胺酶催化的水解反应 | 第44-45页 |
| 2.2.7 乙酰氧肟酸和外消旋2,2-二甲基环丙烷氧肟酸对酰胺酶活力的影响 | 第45页 |
| 2.2.8 分析方法 | 第45页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第45-50页 |
| 2.3.1 2,2-二甲基环丙烷氧肟酸/Fe(Ⅲ)复合物摩尔消光系数的测定 | 第45-46页 |
| 2.3.2 氧肟酸测定法的验证 | 第46-47页 |
| 2.3.3 酰胺酶催化的光学选择性酰基转移反应 | 第47-49页 |
| 2.3.4 乙酰氧肟酸和2,2-二甲基环丙烷氧肟酸对酰胺酶活力的抑制 | 第49-50页 |
| 2.4 本章小结 | 第50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 第三章 2,2-二甲基环丙烷甲酰胺和2,2-二甲基环丙烷甲酸的手性分离及其单体浓度的快速测定方法 | 第53-65页 |
| 3.1 引言 | 第53-54页 |
| 3.2 基于手性平衡的底物、产物单体浓度测定方法原理 | 第54-55页 |
| 3.3 材料与方法 | 第55-56页 |
| 3.3.1 菌种及培养条件 | 第55页 |
| 3.3.2 样品与试剂 | 第55页 |
| 3.3.3 细胞转化及样品处理 | 第55页 |
| 3.3.4 色谱条件 | 第55-56页 |
| 3.3.5 分析方法的校正 | 第56页 |
| 3.3.6 回收率、准确度、精密度、检测限及光学纯度的测定 | 第56页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第56-62页 |
| 3.4.1 色谱条件的选择 | 第56-57页 |
| 3.4.2 方法的线性和检测限 | 第57-58页 |
| 3.4.3 方法的准确度和精密度 | 第58页 |
| 3.4.4 基于手性平衡的底物、产物单体浓度测定 | 第58-62页 |
| 3.5 本章小结 | 第62页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
| 第四章 R-酰胺酶产生菌ZJB-05174的鉴定及其特性研究 | 第65-79页 |
| 4.1 引言 | 第65-66页 |
| 4.2 材料与方法 | 第66-68页 |
| 4.2.1 试剂 | 第66页 |
| 4.2.2 培养基和培养条件 | 第66页 |
| 4.2.3 形态特征的观察 | 第66页 |
| 4.2.4 生理生化特征的测定 | 第66页 |
| 4.2.5 16S rRNA的扩增和序列分析 | 第66-67页 |
| 4.2.6 系统发育学分析 | 第67页 |
| 4.2.7 静息细胞转化 | 第67-68页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第68-74页 |
| 4.3.1 产物鉴定 | 第68-69页 |
| 4.3.2 底物、产物的立体构型 | 第69页 |
| 4.3.3 菌株鉴定 | 第69-72页 |
| 4.3.4 立体选择性催化外消旋2,2-二甲基环丙甲酰胺 | 第72-73页 |
| 4.3.5 D.tsuruhatensis ZJB-05174胞内酰胺酶的热稳定性 | 第73-74页 |
| 4.3.6 尿素对该酰胺酶的抑制 | 第74页 |
| 4.4 本章小结 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
| 第五章 R-酰胺酶产生菌Delftia tsuruhatensis ZJB-05174培养条件的优化 | 第79-93页 |
| 5.1 引言 | 第79页 |
| 5.2 材料与方法 | 第79-81页 |
| 5.2.1 菌种 | 第79-80页 |
| 5.2.2 培养基 | 第80页 |
| 5.2.3 菌体培养 | 第80页 |
| 5.2.4 生物量测定 | 第80页 |
| 5.2.5 酰胺酶活力的测定 | 第80-81页 |
| 5.2.6 分析方法 | 第81页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第81-90页 |
| 5.3.1 用酰胺酶催化的酰基转移反应表征酰胺水解反应活力 | 第81-82页 |
| 5.3.2 产酶培养基组成的优化 | 第82-87页 |
| 5.3.3 其它培养条件对菌体生长和产酶的影响 | 第87-89页 |
| 5.3.4 间歇培养过程中菌体生长及产酶曲线 | 第89-90页 |
| 5.4 本章小结 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-93页 |
| 第六章 D.tsuruhatensis ZJB-05174拆分2,2-二甲基环丙烷甲酰胺反应条件的研究 | 第93-115页 |
| 6.1 引言 | 第93-94页 |
| 6.2 材料与方法 | 第94-95页 |
| 6.2.1 菌种与培养基 | 第94页 |
| 6.2.2 细胞培养 | 第94页 |
| 6.2.3 静息细胞转化 | 第94-95页 |
| 6.2.4 产物的表征 | 第95页 |
| 6.2.5 分析方法 | 第95页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第95-109页 |
| 6.3.1 底物(R,S)-1浓度对拆分效果的影响 | 第95-96页 |
| 6.3.2 反应体系pH对菌体催化拆分(R,S)-1影响 | 第96-97页 |
| 6.3.3 反应温度对静息细胞催化拆分(R,S)-1的影响 | 第97-103页 |
| 6.3.4 添加共溶剂对静息细胞催化拆分(R,S)-1的影响 | 第103-106页 |
| 6.3.5 反应动力学参数的确定 | 第106-107页 |
| 6.3.6 实验室(S)-1的制备及表征 | 第107-109页 |
| 6.4 本章小结 | 第109-112页 |
| 参考文献 | 第112-115页 |
| 第七章 D.tsuruhatensis ZJB-05174催化2,2-二甲基环丙烷甲酰胺合成手性氧肟酸的研究 | 第115-131页 |
| 7.1 引言 | 第115页 |
| 7.2 材料与方法 | 第115-117页 |
| 7.2.1 菌种及细胞培养 | 第115-116页 |
| 7.2.2 (R,S)-3的制备 | 第116页 |
| 7.2.3 有机溶剂对(R,S)-3的萃取 | 第116页 |
| 7.2.4 酰基转移反应的底物特异性 | 第116页 |
| 7.2.5 细胞转化 | 第116-117页 |
| 7.3 结果与讨论 | 第117-127页 |
| 7.3.1 不同有机溶剂对(R,S)-3萃取效果的影响 | 第117页 |
| 7.3.2 酰基转移反应产物的GC-MS分析 | 第117-118页 |
| 7.3.3 (R,S)-2,2-二甲基环丙烷氧肟酸的手性分离 | 第118-119页 |
| 7.3.4 酰基转移反应产物的立体构型 | 第119页 |
| 7.3.5 酰基转移反应的底物特异性 | 第119-120页 |
| 7.3.6 pH值对酰基转移反应的影响 | 第120页 |
| 7.3.7 温度对酰基转移反应的影响 | 第120-121页 |
| 7.3.8 共溶剂对酰基转移反应的影响 | 第121-122页 |
| 7.3.9 羟胺浓度对酰基转移反应的影响 | 第122-124页 |
| 7.3.10 酰基转移反应的动力学及其参数测定 | 第124-127页 |
| 7.4 本章小结 | 第127页 |
| 参考文献 | 第127-131页 |
| 第八章 结论与展望 | 第131-135页 |
| 8.1 结论 | 第131-133页 |
| 8.2 展望 | 第133-135页 |
| 攻读博士学位期间发表论文情况 | 第135-137页 |
| 致谢 | 第137页 |
