| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-15页 |
| 1.1 DNA 的复制起始 | 第8-10页 |
| 1.1.1 DNA 复制起始区 | 第8-9页 |
| 1.1.2 DNA 复制起始蛋白 | 第9-10页 |
| 1.2 洋葱伯克霍尔德氏菌 ATCC 17616 概述 | 第10页 |
| 1.3 复制起始区预测软件 Ori-Finder 概述 | 第10-11页 |
| 1.4 蛋白与核酸的相互作用验证 | 第11-13页 |
| 1.4.1 凝胶电泳迁移分析 | 第11-12页 |
| 1.4.2 表面等离子共振技术 | 第12-13页 |
| 1.4.3 其他方式及研究现状 | 第13页 |
| 1.5 本课题的主要研究内容及相关技术路线 | 第13-15页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第13-14页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第14-15页 |
| 第二章 ATCC 17616 复制起始区的预测 | 第15-19页 |
| 第三章 复制起始区结构域的制备 | 第19-36页 |
| 3.1 制备复制起始区结构域所需实验材料 | 第19-22页 |
| 3.1.1 制备复制起始区结构域所需菌种及载体 | 第19-21页 |
| 3.1.2 制备复制起始区结构域所需主要实验试剂 | 第21页 |
| 3.1.3 制备复制起始区结构域所需主要实验器材 | 第21-22页 |
| 3.1.4 制备复制起始区结构域所需培养基、溶液的配制及灭菌方法 | 第22页 |
| 3.2 制备复制起始区结构域的实验方法 | 第22-29页 |
| 3.2.1 扩增复制起始区引物的设计与合成 | 第22-23页 |
| 3.2.2 包含目的基因 oriC 长片段的获取 | 第23-25页 |
| 3.2.3 载体与回收产物的连接、转化与培养 | 第25-26页 |
| 3.2.4 阳性重组子的鉴定 | 第26-27页 |
| 3.2.5 目的基因 oriC1/2/3 的获取 | 第27-29页 |
| 3.3 制备复制起始区结构域的实验结果 | 第29-36页 |
| 3.3.1 PCR 扩增目的基因 oriC1L/2L/3L | 第29页 |
| 3.3.2 重组克隆载体 pSURE-T/oriC1L/2L/3L 的酶切鉴定 | 第29-31页 |
| 3.3.3 重组克隆载体 pSURE-T-oriC1L/2L/3L 测序结果 | 第31-35页 |
| 3.3.4 PCR 扩增目的片段 oriC1/2/3 | 第35-36页 |
| 第四章 DnaA 结构域的制备 | 第36-58页 |
| 4.1 制备 dnaA 结构域所需实验材料 | 第36-39页 |
| 4.1.1 制备 dnaA 结构域所需菌种及载体 | 第36-37页 |
| 4.1.2 制备 dnaA 结构域所需主要实验试剂 | 第37-38页 |
| 4.1.3 制备 dnaA 结构域所需主要实验器材 | 第38页 |
| 4.1.4 制备 dnaA 结构域所需培养基、溶液的配制及其灭菌方法 | 第38-39页 |
| 4.2 制备 dnaA 结构域的实验方法 | 第39-47页 |
| 4.2.1 pET28-dnaA 表达载体的构建 | 第39-44页 |
| 4.2.2 pET28-dnaA 蛋白的表达 | 第44-46页 |
| 4.2.3 pET28a-dnaA 蛋白的大量制备 | 第46页 |
| 4.2.4 带 His 标签的 pET28a-dnaA 融合蛋白的纯化 | 第46-47页 |
| 4.3 制备 dnaA 结构域的实验结果 40 | 第47-58页 |
| 4.3.1 pET28a-dnaA 表达载体的构建 | 第47-53页 |
| 4.3.2 pET28a-dnaA 融合蛋白的诱导表达 | 第53-56页 |
| 4.3.3 pET28a-dnaA 融合蛋白的纯化 | 第56-58页 |
| 第五章 复制起始蛋白与复制起始区相互作用验证 | 第58-63页 |
| 5.1 oriC-dnaA 相互作用验证所需实验材料 | 第58-60页 |
| 5.1.1 oriC-dnaA 相互作用验证所需实验样品 | 第58页 |
| 5.1.2 oriC-dnaA 相互作用验证所需主要实验试剂 | 第58页 |
| 5.1.3 oriC-dnaA 相互作用验证所需主要实验器材 | 第58页 |
| 5.1.4 溶液的配制及灭菌方法 | 第58-60页 |
| 5.2 oriC-dnaA 相互作用验证的实验方法 | 第60-61页 |
| 5.2.1 EMSA 样品制备 | 第60页 |
| 5.2.2 EMSA 凝胶电泳 | 第60-61页 |
| 5.3 oriC-dnaA 相互作用验证实验结果 | 第61-63页 |
| 第六章 结论与展望 | 第63-65页 |
| 6.1 结论 | 第63-64页 |
| 6.2 展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
