| 中文摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 引言 | 第9-17页 |
| 1. 昆虫的先天免疫 | 第9页 |
| 2. 寄生蜂寄生关系研究 | 第9-11页 |
| 3. Innexin与PI3K信号通路相互作用的研究 | 第11-13页 |
| 4. 细胞通道蛋白研究进展 | 第13-14页 |
| 5. Innexin与hemichannel以及细胞凋亡相互关系研究 | 第14-15页 |
| 6. 细胞凋亡与磷酸根离子相互关系的研究 | 第15页 |
| 7. 本研究的目的与意义 | 第15-17页 |
| 材料与方法 | 第17-30页 |
| 1. 材料 | 第17-20页 |
| 1.1 实验材料 | 第17页 |
| 1.2 昆虫细胞 | 第17页 |
| 1.3 质粒和受体菌株 | 第17页 |
| 1.4 限制性内切酶及其他酶类 | 第17-18页 |
| 1.5 试剂盒及抗体 | 第18页 |
| 1.6 其他主要试剂 | 第18-19页 |
| 1.7 培养基 | 第19页 |
| 1.8 缓冲液 | 第19-20页 |
| 1.9 引物的设计合成 | 第20页 |
| 2. 方法 | 第20-30页 |
| 2.1 斜纹夜蛾血淋巴cDNA的获得 | 第20-22页 |
| 2.2 pIZT/V5-His-Inx1,pIZT/V5-His-Inx4表达载体的构建 | 第22-25页 |
| 2.3 pET32a-Inx1,pET32a-Inx4原核表达载体的构建 | 第25页 |
| 2.4 无内毒素质粒pIZT/V5-His-Inx1,pIZT/V5-His-Inx4的提取 | 第25页 |
| 2.5 细胞转染 | 第25-26页 |
| 2.6 稳定表达细胞系的构建 | 第26页 |
| 2.7 细胞蛋白的提取 | 第26-27页 |
| 2.8 Western blot | 第27-28页 |
| 2.9 细胞荧光试验及实时荧光定量PCR | 第28-30页 |
| 结果 | 第30-52页 |
| 0. 斜纹夜蛾inx1和inx4的组织分布 | 第30-31页 |
| 1. 寄生后SpliInx1和SpliInx4在凋亡信号通路中的转录水平变化 | 第31-36页 |
| 1.1 SpliInx1和SpliInx4与PI3K信号通路 | 第32-34页 |
| 1.2 SpliInx1和SpliInx4与P53信号通路 | 第34-35页 |
| 1.3 SpliInx1和SpliInx4与CypD线粒体凋亡信号通路 | 第35-36页 |
| 2. SpliInx1和SpliInx4的克隆及表达 | 第36-45页 |
| 2.1 SpliInx1和SpliInx4的克隆 | 第36-38页 |
| 2.2 SpliInx1和SpliInx4表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 2.3 斜纹夜蛾SpliInx1,SpliInx4蛋白跨膜结构域预测以及磷酸化位点预测 | 第39-40页 |
| 2.4 斜纹夜蛾SpliInx1,SpliInx4系统进化树的构建与分析 | 第40-41页 |
| 2.5 斜纹夜蛾SpliInx1和SpliInx4的原核表达 | 第41-43页 |
| 2.6 斜纹夜蛾SpliInx1和Splilnx4的真核表达 | 第43-45页 |
| 3. SpliInx1和SpliInx4与PI3K,磷酸根离子的相互关系 | 第45-52页 |
| 3.1 SpliInx1和SpliInx4的膜定位 | 第45-47页 |
| 3.2 稳定表达细胞系中磷酸根离子检测 | 第47-49页 |
| 3.3 Splilnx1和SpliInx4在鳞翅目昆虫细胞系中的表达及磷酸化检测 | 第49-50页 |
| 3.4 Bac-Inxs在Sf9细胞中表达的磷酸根离子检测 | 第50-52页 |
| 讨论 | 第52-57页 |
| 结论 | 第57-60页 |
| 1. 在斜纹夜蛾生长发育过程中SpliInx4在卵巢组织中的表达量最高 | 第57页 |
| 2. 在先天免疫抑制过程中,SpliInx4和p110被抑制,p53和CypD被上调 | 第57页 |
| 3. 成功克隆得到Splilnx1和Splilnx4 | 第57页 |
| 4. SpliInx1和SpliInx4蛋白表达分布于细胞膜和细胞质 | 第57-58页 |
| 5. SpliInx1,SpliInx4促进Sf9,Spli221细胞凋亡 | 第58页 |
| 6. SpliInx3去磷酸化导致细胞凋亡,磷酸根离子与细胞凋亡密切相关 | 第58页 |
| 7. 对下一步工作的建议 | 第58-60页 |
| 本研究的不足与展望 | 第60-61页 |
| 1. 实验材料的采集与饲养 | 第60页 |
| 2. 缺乏干扰实验 | 第60页 |
| 3. 去磷酸化机制未阐明 | 第60-61页 |
| 本研究的创新之处 | 第61-62页 |
| 附录 | 第62-65页 |
| 1. 斜纹夜蛾Splilnx1,Splilnx4的ORF全长序列 | 第62-64页 |
| 2. 原核,真核表达载体构建策略 | 第64页 |
| 3. 主要实验设备 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 在读期间发表论文及获奖情况 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
