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抗缪勒氏管激素在猪卵母细胞和颗粒细胞体外发育中的作用及其机制研究

摘要第5-8页
Abstract第8-10页
缩略词表第15-17页
第一部分 文献综述 抗缪勒氏管激素研究进展第17-31页
    1 AMH及其受体的生物学特征第17-23页
        1.1 AMH的分子生物学特性第17-18页
        1.2 AMH启动子区调控因子第18页
        1.3 AMH特异性受体AMHR2的分子生物学特性及表达第18-19页
        1.4 调控AMH表达的相关因子第19-21页
        1.5 AMH的信号通路第21页
        1.6 AMH在卵巢中的表达模式第21-22页
        1.7 AMH在卵巢中的生理功能第22-23页
    2 AMH与生殖医学第23-27页
        2.1 AMH随年龄的变化模式第23-24页
        2.2 AMH在月经周期的变化第24-25页
        2.3 AMH在妊娠时的变化第25页
        2.4 生理特性与AMH浓度第25页
        2.5 AMH在辅助生殖技术的应用第25-27页
    3 AMH在动物生殖领域的应用第27-31页
        3.1 AMH在动物卵巢上的定位与表达第27页
        3.2 AMH在家畜卵泡周期中的变化第27-28页
        3.3 动物不同生理状态下AMH的变化模式第28-29页
        3.4 AMH在繁殖生产中应用第29-30页
        3.5 AMH与动物卵巢疾病第30-31页
试验研究第31-131页
    第一章 AMH在猪卵巢及其他组织中的表达模式第31-41页
        引言第31-32页
        1 材料与方法第32-37页
            1.1 试验材料第32-33页
            1.2 方法第33-35页
            1.3 猪卵巢免疫荧光染色第35-36页
            1.4 不同直径卵丘颗粒细胞的获取第36页
            1.5 不同直径卵丘卵母细胞的获取第36页
            1.6 不同直径卵泡液的获取第36页
            1.7 AMH的浓度测定第36-37页
        2 结果与分析第37-39页
            2.1 AMH与AMHR2在猪体内不同器官的mRNA表达第37-38页
            2.2 AMH在猪卵巢组织的免疫荧光第38页
            2.3 AMH及AMHR2 mRNA在不同直径卵泡壁层颗粒细胞中的表达第38-39页
            2.4 AMH在不同直径卵泡液中的浓度第39页
        3 讨论第39-41页
    第二章 AMH对猪卵母细胞成熟的影响第41-65页
        引言第41页
        1 材料与方法第41-52页
            1.1 实验材料第41-46页
            1.2 试验方法第46-52页
        2 试验结果第52-61页
            2.1 非限制性培养基中添加AMH对卵母细胞体外成熟和孤雌激活后胚胎发育的影响第52-53页
            2.2 非限制性培养基中添加AMH对卵母细胞卵丘扩散的影响第53-54页
            2.3 猪胚胎培养基中添加AMH对孤雌激活胚胎发育的影响第54页
            2.4 化学限定性培养基中添加PG600和AMH对卵母细胞成熟和孤雌激活后胚胎发育的影响第54-55页
            2.5 AMH添加入限定性培养基对卵母细胞减数分裂进程的影响第55-56页
            2.6 限定性培养基中添加AMH对卵丘扩散的影响第56-57页
            2.7 限定性成熟培养基中添加AMH对COCs中卵丘扩散基因PTX3、HAS2和颗粒细胞凋亡基因CASPASE3、BAX、BCL2基因表达的影响第57-58页
            2.8 化学限定性培养基中添加AMH对1~3mm卵泡来源卵母细胞成熟和孤雌激活胚胎发育的影响第58-59页
            2.9 化学限定性培养基中添加FSH、LH和AMH对卵母细胞成熟和孤雌激活后胚胎发育的影响第59页
            2.10 限定培养基中添加AMH对卵母细胞成熟后体外受精胚胎发育的影响第59-60页
            2.11 限定性成熟培养基中添加AMH对卵母细胞活性氧的检测第60-61页
            2.12 限定成熟培养基中添加PG600和AMH后对MⅡ期卵母细胞GDF9和BMP15基因表达的影响第61页
        3 讨论第61-65页
    第三章 AMH在颗粒细胞中的调控作用第65-85页
        引言第65-66页
        1 材料与方法第66-72页
            1.1 试验材料第66-67页
            1.2 试验方法第67-71页
            1.3 试验设计第71-72页
        2 试验结果第72-82页
            2.1 Percoll方法分离颗粒细胞分层第72页
            2.2 30%和40%层颗粒细胞获得细胞数和存活率比较第72-73页
            2.3 30%和40%层颗粒细胞相关内参比较第73-74页
            2.4 30%和40% Percoll后细胞增殖曲线第74页
            2.5 40%来源颗粒细胞体外培养第74-75页
            2.6 40%来源颗粒细胞FSHR和LHR荧光染色第75-76页
            2.7 不同浓度FSH添加入颗粒细胞中FSHR和CYP19A1表达的影响第76页
            2.8 不同浓度FSH添加入颗粒细胞中对雌激素产生的影响第76-77页
            2.9 AMH添加对细胞周期的影响第77页
            2.10 FSH和AMH共同添加对FSHR和CYP19A1的影响第77-78页
            2.11 FSH和AMH共同添加对雌激素产生的影响第78页
            2.12 Forskolin和AMH的共同添加对颗粒细胞FSHR和CYP19A1的影响第78-79页
            2.13 AMH siRNA干扰载体的验证第79-80页
            2.14 siRNA干扰后添加FSH添加对FSHR和CYP19A1基因表达的影响第80-81页
            2.15 siRNA干扰后添加FSH添加对雌激素产生的影响第81页
            2.16 体外培养条件下颗粒细胞中AMH mRNA表达第81-82页
            2.17 颗粒细胞中睾酮和雌二醇对AMH产生的影响第82页
        3 讨论第82-85页
    第四章 AMH对猪卵泡膜细胞类固醇激素产生的影响第85-104页
        引言第85-86页
        1 材料与方法第86-91页
            1.1 材料第86-87页
            1.2 试验方法第87-91页
            1.3 试验设计第91页
        2 试验结果第91-99页
            2.1 Procoll分离卵巢膜细胞第91-92页
            2.2 膜细胞的体外培养第92-93页
            2.3 膜细胞的免疫荧光鉴定第93-94页
            2.4 流式细胞数鉴定膜细胞纯度第94页
            2.5 AMHR2在膜细胞中的表达第94-95页
            2.6 LH和AMH对膜细胞类固醇产生关键基因的影响第95-96页
            2.7 LH和AMH对膜细胞产生雄烯二酮和孕酮的影响第96-97页
            2.8 siRNA干扰AMHR2的验证第97-98页
            2.9 AMHR2抑制后与LH和AMH共同添加对类固醇生成相关基因的影响第98-99页
            2.10 AMHR2抑制后与LH和AMH共同添加对雄烯二酮和孕酮产生的影响第99页
        3 讨论第99-104页
    第五章 AMH对猪腔前卵泡体外培养基因的表达谱分析第104-131页
        引言第104-105页
        1 材料与方法第105-112页
            1.1 材料第105页
            1.2 试验方法第105-112页
            1.3 数据分析第112页
        2 试验结果第112-126页
            2.1 AMH处理对PFs-OGCs成腔和成活率的影响第112-113页
            2.2 RNA样品质量检测第113-114页
            2.3 测序结果分析第114-115页
            2.4 测序长度评估第115-116页
            2.5 测序饱和度分析第116-117页
            2.6 基因覆盖度统计第117-118页
            2.7 条件特异性表达统计图第118-120页
            2.8 3D PCA分析图第120页
            2.9 差异表达基因筛选第120-122页
            2.10 基因表达模式聚类分析第122页
            2.11 Gene Ontology功能分类第122-123页
            2.12 Gene Ontology功能显著性富集分析第123-126页
            2.13 基因芯片差异基因验证第126页
        3 讨论第126-131页
            3.1 主要富集通路通路相关基因功能分析第127-130页
            3.2 与已经报道的AMH芯片结果比较分析第130-131页
全文结论第131-132页
创新性第132-133页
参考文献第133-148页
致谢第148-150页
个人简历第150-151页

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