| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-17页 |
| 引言 | 第17-18页 |
| 1 材料与方法 | 第18-35页 |
| 1.1 材料 | 第18-22页 |
| 1.1.1 病料来源 | 第18页 |
| 1.1.2 实验动物 | 第18页 |
| 1.1.3 质粒与菌株 | 第18页 |
| 1.1.4 工具酶与相关试剂 | 第18页 |
| 1.1.5 主要试剂配制 | 第18-21页 |
| 1.1.6 主要仪器 | 第21-22页 |
| 1.2 CIAV的分离与鉴定 | 第22-25页 |
| 1.2.1 组织DNA的制备 | 第22页 |
| 1.2.2 引物设计与合成 | 第22-23页 |
| 1.2.3 CIAV基因片段的扩增与纯化 | 第23-24页 |
| 1.2.4 载体连接 | 第24页 |
| 1.2.5 感受态细胞的制备 | 第24页 |
| 1.2.6 转化 | 第24页 |
| 1.2.7 重组质粒的筛选及鉴定 | 第24-25页 |
| 1.3 CIAV安徽分离株感染性克隆的构建 | 第25-29页 |
| 1.3.1 构建策略 | 第25-26页 |
| 1.3.2 引物设计与合成 | 第26页 |
| 1.3.3 CIAV全基因组的PCR扩增与回收 | 第26-27页 |
| 1.3.4 载体与目的片段的双酶切反应 | 第27页 |
| 1.3.5 重组质粒pcD-CIAV的构建 | 第27页 |
| 1.3.6 重组质粒pcD-2CIAV的构建 | 第27-28页 |
| 1.3.7 超纯真核质粒的提取 | 第28-29页 |
| 1.3.8 攻毒试验 | 第29页 |
| 1.4 Apoptin基因的表达及其免疫活性分析 | 第29-35页 |
| 1.4.1 引物的设计与合成 | 第29页 |
| 1.4.2 Apoptin基因的克隆与鉴定 | 第29-30页 |
| 1.4.3 pET-32a-Apoptin重组质粒的构建 | 第30页 |
| 1.4.4 Apoptin基因与质粒载体的重组连接 | 第30-31页 |
| 1.4.5 pET-32a-Apoptin重组质粒阳性克隆的筛选及鉴定 | 第31页 |
| 1.4.6 pET-32a-Apoptin重组质粒原核表达的诱导 | 第31-32页 |
| 1.4.7 重组蛋白表达条件的优化 | 第32页 |
| 1.4.8 融合蛋白表达形式的鉴定 | 第32-33页 |
| 1.4.9 融合蛋白大量提取与纯化 | 第33页 |
| 1.4.10 动物免疫 | 第33页 |
| 1.4.11 间接ELISA检测方法的建立 | 第33-34页 |
| 1.4.12 Western Blotting | 第34-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-45页 |
| 2.1 CIAV安徽分离株的分离鉴定结果 | 第35-37页 |
| 2.1.1 送检病鸡的剖检病变 | 第35页 |
| 2.1.2 病毒的鉴定结果 | 第35-36页 |
| 2.1.3 CIAV-AH211分离株VP1基因遗传进化分析 | 第36-37页 |
| 2.2 CIAV-AH211安徽分离株感染性克隆的构建结果 | 第37-40页 |
| 2.2.1 CIAV全基因组扩增结果 | 第37-38页 |
| 2.2.2 含单双拷贝CIAV基因组的重组质粒的构建结果 | 第38-39页 |
| 2.2.3 攻毒后病理剖检与病毒的检测结果 | 第39-40页 |
| 2.3 Apoptin蛋白的原核表达及抗体制备结果 | 第40-45页 |
| 2.3.1 pET-32a-Apoptin重组质粒的鉴定结果 | 第40-41页 |
| 2.3.2 重组蛋白的诱导表达与鉴定 | 第41页 |
| 2.3.3 诱导剂浓度的优化 | 第41-42页 |
| 2.3.4 诱导时间的优化 | 第42页 |
| 2.3.5 融合蛋白表达形式的鉴定结果 | 第42-43页 |
| 2.3.6 融合蛋白纯化效果 | 第43页 |
| 2.3.7 融合蛋白最佳包被的浓度 | 第43-44页 |
| 2.3.8 Apoptin重组蛋白的抗原特性 | 第44-45页 |
| 3 讨论 | 第45-47页 |
| 4 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 作者简介 | 第54页 |
