| 目录 | 第1-7页 |
| 图表索引 | 第7-9页 |
| 英文缩略词 | 第9-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 前言 | 第14-17页 |
| 材料与方法 | 第17-37页 |
| 一. 实验材料 | 第17-26页 |
| 1. 细胞 | 第17页 |
| ·肿瘤细胞系 | 第17页 |
| ·杂交瘤细胞系 | 第17页 |
| 2. 动物 | 第17页 |
| NOD/SCID小鼠 | 第17页 |
| 3. 主要试剂 | 第17-22页 |
| ·抗体 | 第17-19页 |
| ·常用试剂及器材 | 第19-22页 |
| 4. 主要仪器及设备 | 第22-23页 |
| 5. 计算机分析软件 | 第23-24页 |
| 6. 主要自配试剂及其配方 | 第24-26页 |
| 二. 实验方法 | 第26-37页 |
| 1. 各个细胞系的细胞培养 | 第26-27页 |
| ·肿瘤细胞系的传代与培养 | 第26页 |
| ·肿瘤细胞系sphere细胞的传代与培养 | 第26页 |
| ·PKH26亲脂性荧光染料对细胞进行染色并追踪CSCs在sphere细胞形成过程中的定位 | 第26-27页 |
| ·人胰腺癌组织在SCID鼠体内传代 | 第27页 |
| ·细胞与移植瘤细胞的分离培养 | 第27页 |
| 2. 流式细胞术检测标志物比例 | 第27-29页 |
| ·侧群干细胞的分离鉴定 | 第27-28页 |
| ·细胞膜表面标志物比例鉴定 | 第28页 |
| ·直接标记抗体的比例鉴定 | 第28页 |
| ·间接标记的抗体比例鉴定 | 第28页 |
| ·细胞内标志物比例鉴定 | 第28-29页 |
| ·流式细胞术检测荧光双染 | 第29页 |
| 3. 细胞免疫荧光 | 第29-31页 |
| ·活细胞免疫细胞荧光 | 第29-30页 |
| ·固定细胞免疫荧光 | 第30页 |
| ·固定细胞免疫荧光双染 | 第30-31页 |
| ·免疫荧光检测sphere球体中标志物表达情况 | 第31页 |
| 4. 酶联接免疫吸附剂测定 | 第31-32页 |
| 5. 候选CSCs单克隆抗体体外细胞功能实验 | 第32-35页 |
| ·A549亲本细胞与其sphere细胞顺铂药物抵抗能力比较 | 第32-33页 |
| ·单克隆抗体对sphere形成抑制实验 | 第33页 |
| ·细胞增殖分析 | 第33-35页 |
| 6. 动物实验 | 第35-36页 |
| ·NOD/SCID鼠致瘤实验 | 第35页 |
| ·人组织标本移植瘤在NOD/SCID鼠内传代 | 第35-36页 |
| 7. 单克隆抗体纯化——疏水层析纯化IgM抗体 | 第36页 |
| 8. 统计学分析 | 第36-37页 |
| 第一部分:肺癌肿瘤干细胞靶向治疗的研究 | 第37-61页 |
| 结果 | 第37-55页 |
| 1. 肺癌细胞系中CSCs的研究 | 第37-49页 |
| ·流式细胞术检测各肺癌细胞系中的SP细胞比例 | 第37-39页 |
| ·流式细胞术检测各肺癌细胞系中CD133阳性细胞比例 | 第39-40页 |
| ·肺癌细胞sphere培养有富集CSCs的能力 | 第40-49页 |
| ·A549细胞进行sphere培养可富集A549细胞中CSCs | 第40-46页 |
| ·A549细胞经PKH26荧光染料染色后其sphere的生长中细胞分裂的过程 | 第40-41页 |
| ·A549CSCs与sphere中PKH26阳性细胞进行球体原位荧光染色的结果 | 第41-42页 |
| ·流式细胞术检测A549与其sphere细胞中干性标志物表达阳性细胞的比例 | 第42-44页 |
| ·采用公式法计算A549亲本细胞和sphere细胞的顺铂IC50并进行比较 | 第44-46页 |
| ·H460 sphere的培养及鉴定 | 第46-49页 |
| ·PKH26追踪H460 sphere生长过程 | 第46-47页 |
| ·流式细胞术检测H460与其sphere细胞中干性标志物的表达比例 | 第47-49页 |
| 2. 多株候选CSCs单克隆抗体对肺癌A549细胞系中的CSCs的识别情况 | 第49-52页 |
| ·流式细胞术检测肺腺癌细胞系A549与其sphere细胞中多株候选CSCs单克隆抗体的识别情况 | 第49-50页 |
| ·各种候选CSCs单克隆抗体在A549亲本细胞中所识别的细胞中CSCs相关标志物的表达 | 第50-52页 |
| 3. 候选CSCs单克隆抗体对肺癌A549细胞系CSCs及其亲本细胞的体外功能 | 第52-55页 |
| ·候选CSCs单克隆抗体对A549细胞sphere形成功能的影响 | 第52-54页 |
| ·各种候选CSCs单克隆抗体对A549细胞增殖的影响 | 第54-55页 |
| 讨论 | 第55-61页 |
| 第二部分:胰腺癌干细胞靶向治疗的研究 | 第61-84页 |
| 结果 | 第61-78页 |
| 1. 胰腺癌细胞系ESA~+CD24~+CD44~+细胞的检测 | 第61-62页 |
| ·流式细胞术检测各胰腺癌细胞系中ESA~+CD24~+CD44~+细胞的比例 | 第61-62页 |
| 2. 流式细胞术检测候选胰腺癌CSCs单克隆抗体在PANC1细胞中识别CSCs的情况 | 第62-68页 |
| ·流式细胞术检测候选CSCs单克隆抗体在PANC1及其sphere细胞中的识别 | 第62-63页 |
| ·PANC1细胞中ESA~+CD24~+CD44~+细胞与各个候选CSCs单克隆抗体识别细胞的共定位情况 | 第63-68页 |
| ·流式细胞术检测PANC1细胞中ESA~+CD24~+CD44~+细胞与各个候选CSCs单克隆抗体识别细胞的共定位 | 第63-67页 |
| ·免疫荧光染色检测PANC1细胞中CD24+细胞与各个候选CSCs单克隆抗体的共定位 | 第67-68页 |
| 3. 体外检测抗体对PANC1细胞成球及增殖的功能影响 | 第68-75页 |
| ·各种候选CSCs单克隆抗体对PANC1细胞sphere形成的功能影响 | 第68-70页 |
| ·各种CSCs候选单克隆抗体对PANC1 sphere细胞增殖的影响 | 第70-72页 |
| ·各种CSCs候选单克隆抗体对PANC1细胞增殖的影响 | 第72-75页 |
| 4. 抗体在胰腺癌组织标本中的表达 | 第75-78页 |
| ·胰腺癌标本在SCID鼠体内传代情况及ESA~+CD24~+CD44~+的比例在三代移植瘤中的结果总结 | 第75-76页 |
| ·流式细胞术检测胰腺癌临床标本细胞中ESA~+CD24~+CD44~+细胞与各个CSCs候选单克隆抗体共染情况 | 第76-78页 |
| 讨论 | 第78-84页 |
| 小结 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-87页 |
| 论文综述 | 第87-107页 |
| 参考文献 | 第101-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 附录 | 第108页 |
| 个人简历 | 第108-109页 |
| 基金资助情况 | 第109-110页 |
