| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文縮略词 | 第7-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-35页 |
| 1.1 转基因鸡研究进展 | 第11-19页 |
| 引言 | 第11页 |
| 1.1.1 受精卵操作法 | 第11-12页 |
| 1.1.2 利用胚胎干细胞制备嵌合体 | 第12-13页 |
| 1.1.3 原始生殖细胞转移法制备生殖系嵌合体 | 第13-15页 |
| 1.1.4 利用病毒载体进行转基因 | 第15-19页 |
| 1.2 慢病毒载体研究进展 | 第19-30页 |
| 引言 | 第19页 |
| 1.2.1 慢病毒 | 第19-20页 |
| 1.2.2 慢病毒载体 | 第20-24页 |
| 1.2.3 慢病毒载体的发展历程 | 第24-25页 |
| 1.2.4 慢病毒假型化包膜的发展历程 | 第25-27页 |
| 1.2.5 慢病毒载体的制备 | 第27-29页 |
| 1.2.6 慢病毒载体的应用 | 第29-30页 |
| 1.3 溶菌酶研究简介 | 第30-33页 |
| 1.3.1 溶菌酶的分类 | 第31-32页 |
| 1.3.2 重组人溶菌酶研究 | 第32-33页 |
| 1.4 本研究的目的和技术路线 | 第33-35页 |
| 1.4.1 研究目的 | 第33-34页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第34-35页 |
| 第二章 材料与方法 | 第35-61页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-41页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第35页 |
| 2.1.2 细胞系 | 第35页 |
| 2.1.3 实验鸡蛋和种母鸡 | 第35页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第35-37页 |
| 2.1.5 试剂的配制 | 第37-39页 |
| 2.1.6 实验仪器及耗材 | 第39-40页 |
| 2.1.7 实验分析软件 | 第40-41页 |
| 2.2 实验方法 | 第41-61页 |
| 2.2.1 感受态细胞的制备 | 第41页 |
| 2.2.2 感受态细胞的转化 | 第41页 |
| 2.2.3 DNA片段的连接 | 第41-42页 |
| 2.2.4 质粒DNA的制备 | 第42-43页 |
| 2.2.5 PCR产物与酶切产物的胶回收 | 第43-44页 |
| 2.2.6 PCR反应 | 第44页 |
| 2.2.7 菌落PCR法 | 第44-45页 |
| 2.2.8 总RNA的提取(Trizol法) | 第45页 |
| 2.2.9 RNA的反转录 | 第45-46页 |
| 2.2.10 HotSHOT提取DNA法 | 第46页 |
| 2.2.11 DNA的提取 | 第46页 |
| 2.2.12 Southern Blot | 第46-49页 |
| 2.2.13 细胞蛋白提取 | 第49页 |
| 2.2.14 蛋白定量 | 第49页 |
| 2.2.15 Western Blot | 第49-51页 |
| 2.2.16 细胞培养 | 第51-52页 |
| 2.2.17 病毒包装流程(Fugene HD转染方法) | 第52-53页 |
| 2.2.18 病毒滴度测定 | 第53-55页 |
| 2.2.19 Genome Walking | 第55-57页 |
| 2.2.20 ELISA测定人溶菌酶含量 | 第57-58页 |
| 2.2.21 免疫荧光 | 第58页 |
| 2.2.22 替代壳制备 | 第58页 |
| 2.2.23 鸡胚显微注射(胚盘下腔注射) | 第58-59页 |
| 2.2.24 第一次换壳操作 | 第59页 |
| 2.2.25 第二次换壳操作 | 第59-60页 |
| 2.2.26 鸡胚孵化 | 第60页 |
| 2.2.27 鸡的采精与输精 | 第60-61页 |
| 第三章 G_0代嵌合体鸡的制备和检测 | 第61-81页 |
| 引言 | 第61页 |
| 3.1 载体构建 | 第61-69页 |
| 3.1.1 载体构建的策略 | 第61-62页 |
| 3.1.2 ERE和OV的克隆 | 第62-65页 |
| 3.1.3 人工合成人溶菌酶cDNA序列 | 第65-68页 |
| 3.1.4 慢病毒载体构建 | 第68-69页 |
| 3.2 慢病毒包装 | 第69-72页 |
| 3.2.1 慢病毒制备 | 第69-70页 |
| 3.2.2 慢病毒滴度测定 | 第70-72页 |
| 3.3 鸡胚注射及培养 | 第72-77页 |
| 3.3.1 鸡胚注射 | 第72页 |
| 3.3.2 鸡胚培养 | 第72-74页 |
| 3.3.3 鸡胚注射及培养结果 | 第74-77页 |
| 3.4 G_0代鸡外源基因检测 | 第77-81页 |
| 3.4.1 G_0代鸡胚检测 | 第77-78页 |
| 3.4.2 G_0代育成期鸡检测 | 第78-81页 |
| 第四章 转人溶菌酶鸡的制备和检测 | 第81-99页 |
| 引言 | 第81页 |
| 4.1 G_0代公鸡精液外源基因检测 | 第81-83页 |
| 4.2 G_0代公鸡的传代 | 第83页 |
| 4.3 G_1代转基因鸡鉴定 | 第83-90页 |
| 4.3.1 PCR鉴定 | 第83-85页 |
| 4.3.2 Southern Blot鉴定 | 第85-88页 |
| 4.3.3 Genome Walking鉴定转基因插入位点 | 第88-90页 |
| 4.4 G_1代转基因母鸡蛋白检测 | 第90-91页 |
| 4.5 G_1代转基因鸡的传代 | 第91-93页 |
| 4.6 G_2代转基因母鸡蛋白检测 | 第93-94页 |
| 4.7 重组人溶菌酶在鸡输卵管特异性表达检测 | 第94-96页 |
| 4.7.1 RT-PCR检测hLY的转录情况 | 第94-95页 |
| 4.7.2 免疫荧光检测hLY在鸡输卵管的表达情况 | 第95-96页 |
| 4.8 讨论 | 第96-99页 |
| 第五章 结论 | 第99-101页 |
| 参考文献 | 第101-113页 |
| 附录 | 第113-125页 |
| 致谢 | 第125-127页 |
| 作者简历 | 第127页 |
