| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-15页 |
| ·副猪嗜血杆菌主要毒力因子的研究进展 | 第11-13页 |
| ·主要毒力因子的研究进展 | 第11-13页 |
| ·基因工程方法构建细菌突变株的研究进展 | 第13-15页 |
| ·DNA 标签法 | 第13页 |
| ·基于载体构建的突变体 | 第13-14页 |
| ·RNA 干扰技术 | 第14页 |
| ·基因打靶技术 | 第14-15页 |
| 第二章 副猪嗜血杆菌hhdA 基因缺失株的外源打靶载体的构建 | 第15-22页 |
| ·材料与方法 | 第15-17页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第15页 |
| ·菌株、质粒、培养基 | 第15页 |
| ·待融合片段的独立扩增 | 第15-16页 |
| ·重叠PCR 条件优化及外源打靶基因的构建 | 第16-17页 |
| ·打靶载体的构建 | 第17页 |
| ·打靶载体在宿主菌中的稳定性分析 | 第17页 |
| ·结果 | 第17-20页 |
| ·三个待融合片段的PCR 扩增 | 第17-18页 |
| ·重叠PCR 条件和融合片段的构建 | 第18-19页 |
| ·打靶载体的构建 | 第19-20页 |
| ·打靶载体稳定性分析 | 第20页 |
| ·讨论 | 第20-22页 |
| 第三章 副猪嗜血杆菌hhdA 基因缺失株的构建及其主要生物学性状的研究 | 第22-30页 |
| ·材料与方法 | 第22-24页 |
| ·主要试验仪器与试剂 | 第22页 |
| ·试验质粒、菌株及培养条件 | 第22页 |
| ·实验动物及分组 | 第22页 |
| ·电转前HPS 处理 | 第22-23页 |
| ·电转化 | 第23页 |
| ·重组克隆的筛选鉴定及生化试验鉴定 | 第23-24页 |
| ·HPS hhdA 基因缺失株生长特性 | 第24页 |
| ·HPS hhdA 基因缺失株豚鼠感染试验 | 第24页 |
| ·豚鼠感染试验临床和剖检观察 | 第24页 |
| ·细菌学检查 | 第24页 |
| ·结果 | 第24-28页 |
| ·HPS hhdA 筛选鉴定及生化鉴定 | 第24-25页 |
| ·HPS hhdA 基因缺失株生长特性 | 第25-26页 |
| ·豚鼠感染试验临床和剖检观察 | 第26-27页 |
| ·PCR 鉴定感染豚鼠分离菌 | 第27-28页 |
| ·讨论 | 第28-30页 |
| 第四章 副猪嗜血杆菌胞外丝氨酸蛋白酶的克隆及序列分析 | 第30-37页 |
| ·材料与方法 | 第30-31页 |
| ·菌株和载体 | 第30页 |
| ·培养基及主要试剂 | 第30页 |
| ·引物的设计与合成 | 第30页 |
| ·目的基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·HPS 胞外丝氨酸蛋白酶氨基酸序列的分析 | 第31页 |
| ·HPS 胞外丝氨酸蛋白酶3-D 结构的预测 | 第31页 |
| ·HPS 抗原表位的分析 | 第31页 |
| ·结果 | 第31-36页 |
| ·HPS espP 基因的克隆 | 第31-32页 |
| ·HPS 胞外丝氨酸蛋白酶序列分析 | 第32-34页 |
| ·HPS 丝氨酸蛋白酶3-D 结构预测 | 第34-35页 |
| ·HPS 胞外丝氨酸蛋白酶抗原表位的分析 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-37页 |
| 第五章 副猪嗜血杆菌胞外丝氨酸蛋白酶的表达及免疫原性的研究 | 第37-43页 |
| ·材料与方法 | 第37-39页 |
| ·菌株、载体与实验动物 | 第37页 |
| ·主要试剂与器材 | 第37页 |
| ·重组表达质粒的构建和鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第38页 |
| ·电洗脱法纯化蛋白 | 第38页 |
| ·动物免疫试验 | 第38-39页 |
| ·结果 | 第39-41页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第39页 |
| ·重组蛋白表达产物SDS-PAGE 鉴定 | 第39-40页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第40-41页 |
| ·攻击试验后豚鼠的临床症状和病理变化 | 第41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第六章 全文结论 | 第43-44页 |
| · | 第43页 |
| · | 第43页 |
| · | 第43页 |
| · | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 作者简历 | 第51页 |
