| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| ·羊奶脂肪酸组成及其营养价值 | 第13-14页 |
| ·SREBPs 基因 | 第14-18页 |
| ·SREBPs 基因结构 | 第14-15页 |
| ·SREBPs 的活化过程 | 第15页 |
| ·胰岛素诱导基因 Insigs | 第15-16页 |
| ·SREBP-1 基因的调节 | 第16-18页 |
| ·SREBP 蛋白的降解 | 第18页 |
| ·SREBPs 与脂类代谢 | 第18-20页 |
| ·SREBP-1 在泌乳过程中的作用 | 第20页 |
| ·SREBPs 与代谢疾病 | 第20-22页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 西农萨能羊 SREBP-1 基因的 cDNA 克隆及序列分析 | 第23-40页 |
| ·材料与方法 | 第23-30页 |
| ·试验材料 | 第23-24页 |
| ·试剂 | 第24页 |
| ·仪器 | 第24页 |
| ·引物设计 | 第24-25页 |
| ·组织总 RNA 的提取 | 第25页 |
| ·第一链 cDNA 的合成 | 第25-26页 |
| ·SREBP-1 基因 CDS 区的 PCR 扩增 | 第26页 |
| ·SREBP-1 基因 5′UTR 的 PCR 扩增 | 第26-27页 |
| ·SREBP-1 基因 3′UTR 的 PCR 扩增 | 第27-29页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第29页 |
| ·目的基因的连接和转化 | 第29-30页 |
| ·序列分析 | 第30页 |
| ·组织表达分析 | 第30页 |
| ·结果与分析 | 第30-37页 |
| ·组织总 RNA 的提取 | 第30-31页 |
| ·西农萨能羊 SREBP-1 基因 cDNA 克隆 | 第31-32页 |
| ·西农萨能羊 SREBP-1 基因的序列分析 | 第32-35页 |
| ·西农萨能羊 SREBP-1 基因的同源性比较 | 第35页 |
| ·西农萨能羊 SREBP-1 基因的结构预测分析 | 第35-36页 |
| ·山羊 SREBP-1 基因的系统进化树分析 | 第36页 |
| ·山羊 SREBP-1 基因的组织表达分析 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| ·高 GC 含量的长片段的基因扩增 | 第37页 |
| ·SREBP-1 基因的结构与功能分析 | 第37-38页 |
| ·SREBP-1 基因的组织表达分析 | 第38页 |
| ·小结 | 第38-40页 |
| 第三章 西农萨能羊 SREBP-1 基因的过表达研究 | 第40-52页 |
| ·材料与方法 | 第40-45页 |
| ·试验材料 | 第40-41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·pAdTrack-CMV-SREBP-1 载体的构建与鉴定 | 第41-42页 |
| ·BJ. 5183 感受态细胞（含腺病毒骨架载体 pAdEasey-1）的制备 | 第42页 |
| ·pAdTrack-CMV-SREBP-1 质粒的 PmeⅠ线性化 | 第42页 |
| ·Ad-SREBP-1 重组腺病毒载体的构建与鉴定 | 第42-43页 |
| ·Ad-SREBP-1 重组质粒酶切产物的纯化回收 | 第43-44页 |
| ·Ad-SREBP-1 重组腺病毒的包装与扩增 | 第44页 |
| ·Ad-SREBP-1 重组腺病毒滴度的测定 | 第44页 |
| ·Ad-SREBP-1 重组腺病毒感染乳腺上皮细胞最佳 MOI 值的确定 | 第44页 |
| ·Ad-SREBP-1 重组腺病毒超表达效果的检测 | 第44-45页 |
| ·SREBP-1 基因过表达对脂肪酸代谢相关基因的影响 | 第45页 |
| ·结果与分析 | 第45-49页 |
| ·pAdTrack-CMV-SREBP-1 载体的构建与鉴定 | 第45-46页 |
| ·Ad-SREBP-1 重组腺病毒载体的构建与鉴定 | 第46页 |
| ·Ad-SREBP-1 重组腺病毒的包装、扩增及滴度测定 | 第46-47页 |
| ·腺病毒感染乳腺上皮细胞最佳 MOI 值的确定 | 第47-48页 |
| ·乳腺上皮细胞中 SREBP-1 的超表达效果检测 | 第48页 |
| ·SREBP-1 基因超表达对脂肪酸代谢相关基因的影响 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| ·腺病毒的包装及扩增 | 第49-50页 |
| ·SREBP-1 超表达对脂肪酸代谢相关基因的影响 | 第50-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 第四章 西农萨能羊 SREBP-1 基因的 RNA 干扰研究 | 第52-65页 |
| ·材料与方法 | 第52-57页 |
| ·材料 | 第52页 |
| ·主要仪器 | 第52-53页 |
| ·靶向 SREBP-1 基因的 shRNA 干扰序列的设计与合成 | 第53-54页 |
| ·pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA 载体的构建 | 第54-55页 |
| ·pDsRed1-C1-SREBP-1 表达载体的构建 | 第55页 |
| ·有效 shRNA 序列的筛选 | 第55-56页 |
| ·pAD/PL-DEST/CMV-GFP/U6-shRNA 重组腺病毒载体的构建及鉴定 | 第56页 |
| ·腺病毒的包装、扩增及滴度测定 | 第56-57页 |
| ·pAD/PL-DEST/CMV-GFP/U6-shRNA 重组腺病毒感染乳腺上皮细胞最佳MOI 值的确定 | 第57页 |
| ·pAD/PL-DEST/CMV-GFP/U6-shRNA 重组腺病毒干扰效果的检测 | 第57页 |
| ·SREBP-1 基因干扰对脂肪酸代谢相关基因的影响 | 第57页 |
| ·结果与分析 | 第57-62页 |
| ·pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA 载体的构建与鉴定 | 第57页 |
| ·pDsRed1-C1-SREBP-1 载体的构建与鉴定 | 第57-58页 |
| ·靶向 SREBP-1 基因的 shRNA 序列筛选 | 第58-59页 |
| ·pAd/PL-DEST/CMV-GFP/U6-shRNA 重组腺病毒载体的构建与鉴定 | 第59-60页 |
| ·腺病毒的包装、扩增及滴度测定 | 第60-61页 |
| ·pAd/PL-DEST/CMV-GFP/U6-shRNA 重组腺病毒感染乳腺上皮细胞最佳MOI 的确定 | 第61页 |
| ·乳腺上皮细胞中 SREBP-1 基因的干扰效率检测 | 第61页 |
| ·SREBP-1 基因干扰对脂肪酸代谢相关基因的影响 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| ·siRNA 序列的设计及筛选 | 第62-63页 |
| ·SREBP-1 基因干扰对脂肪酸代谢相关基因的影响 | 第63-64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 附录 | 第72-77页 |
| 缩略词 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 作者简介 | 第79页 |
