| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-28页 |
| 1.1 高等植物成花研究概述 | 第14页 |
| 1.2 高等植物成花基因研究进展 | 第14-18页 |
| 1.2.1 光周期途径 | 第14-15页 |
| 1.2.2 春化途径 | 第15-16页 |
| 1.2.3 自主途径 | 第16-18页 |
| 1.3 FT基因研究进展 | 第18-21页 |
| 1.3.1 FT基因的分子生物学和功能进化 | 第18-19页 |
| 1.3.2 FT蛋白的作用模式 | 第19页 |
| 1.3.3 FT基因调控开花过程 | 第19-21页 |
| 1.3.4 FT基因调控休眠过程 | 第21页 |
| 1.4 瞬时表达方法研究进展 | 第21-26页 |
| 1.4.1 农杆菌介导的瞬时表达原理 | 第22页 |
| 1.4.2 农杆菌介导的方法 | 第22页 |
| 1.4.3 影响农杆菌瞬时表达的因素 | 第22-25页 |
| 1.4.4 瞬时表达技术的应用 | 第25-26页 |
| 1.5 本研究的选题依据与主要研究内容 | 第26-28页 |
| 1.5.1 选题依据 | 第26-27页 |
| 1.5.2 本研究的主要内容 | 第27-28页 |
| 第二章 桑树FT基因原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体的制备 | 第28-38页 |
| 2.1 材料 | 第28页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第28页 |
| 2.1.2 试验仪器 | 第28页 |
| 2.2 方法 | 第28-32页 |
| 2.2.1 桑叶总RNA提取 | 第28页 |
| 2.2.2 FT片段的扩增 | 第28-29页 |
| 2.2.3 重组载体的构建 | 第29-31页 |
| 2.2.4 FT基因在大肠杆菌中的表达及表达产物的SDS-PAGE分析 | 第31页 |
| 2.2.5 重组蛋白的可溶性分析 | 第31页 |
| 2.2.6 包涵体纯化及复性 | 第31页 |
| 2.2.7 多克隆抗体的制备 | 第31-32页 |
| 2.2.8 多克隆抗体的检测 | 第32页 |
| 2.3 结果和分析 | 第32-36页 |
| 2.3.1 FT基因的PCR扩增 | 第32页 |
| 2.3.2 FT基因的T克隆 | 第32-33页 |
| 2.3.3 FT基因原核表达载体的构建及鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.4 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第34页 |
| 2.3.5 重组蛋白的可溶性分析及包涵体的纯化 | 第34-35页 |
| 2.3.6 纯化后蛋白的复性 | 第35页 |
| 2.3.7 复性蛋白的浓度测定 | 第35页 |
| 2.3.8 多克隆抗体制备与ELISA检测 | 第35-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-37页 |
| 2.5 小结 | 第37-38页 |
| 第三章 pBE2113-FT-GFP 植物表达载体构建及促进拟南芥开花功能的研究 | 第38-47页 |
| 3.1 试验材料与试剂 | 第38页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第38页 |
| 3.1.2 试验仪器 | 第38页 |
| 3.2 试验方法 | 第38-41页 |
| 3.2.0 pBE2113-GFP载体构建 | 第38-39页 |
| 3.2.1 pBE2113-FT-GFP载体构建 | 第39页 |
| 3.2.2 农杆菌感受态的制备及质粒的转化 | 第39-40页 |
| 3.2.3 拟南芥的种植 | 第40页 |
| 3.2.4 转染用农杆菌的准备 | 第40页 |
| 3.2.5 转染拟南芥 | 第40页 |
| 3.2.6 转基因拟南芥的筛选 | 第40页 |
| 3.2.7 转基因拟南芥的RNA提取及RT-PCR检测 | 第40-41页 |
| 3.2.8 转基因拟南芥Western blot鉴定 | 第41页 |
| 3.2.9 转基因拟南芥植株的表型分析 | 第41页 |
| 3.3 结果 | 第41-45页 |
| 3.3.1 GFP扩增和pBE2113-GFP载体构建 | 第41-42页 |
| 3.3.2 FT的扩增 | 第42页 |
| 3.3.3 pBE2113-FT-GFP载体构建 | 第42-43页 |
| 3.3.4 转化农杆菌的检测 | 第43页 |
| 3.3.5 转基因拟南芥的RT-PCR检测 | 第43-44页 |
| 3.3.6 转基因拟南芥Western blot检测 | 第44-45页 |
| 3.3.7 拟南芥的抗性筛选 | 第45页 |
| 3.4 讨论 | 第45-46页 |
| 3.5 小结 | 第46-47页 |
| 第四章 利用农杆菌介导的瞬时表达体系研究FT的功能 | 第47-59页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第47-48页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第47页 |
| 4.1.2 试验所需溶液配制 | 第47-48页 |
| 4.1.3 试验仪器 | 第48页 |
| 4.2 试验方法 | 第48-51页 |
| 4.2.1 用于瞬时转化农杆菌的准备 | 第48页 |
| 4.2.2 真空渗透法与注射器渗透法 | 第48页 |
| 4.2.3 GUS染色方法与GFP荧光观察 | 第48-49页 |
| 4.2.4 瞬时表达条件的优化 | 第49页 |
| 4.2.5 桑树FT基因的瞬时表达 | 第49-51页 |
| 4.3 结果 | 第51-57页 |
| 4.3.1 不同的渗透方法对表达的影响 | 第51页 |
| 4.3.2 不同农杆菌菌株对瞬时表达的影响 | 第51-52页 |
| 4.3.3 不同菌体浓度对表达量的影响 | 第52页 |
| 4.3.4 桑叶的生理状态对瞬时表达的影响 | 第52-53页 |
| 4.3.5 不同桑树品种对瞬时表达的影响 | 第53页 |
| 4.3.6 桑树FT基因的瞬时表达 | 第53-55页 |
| 4.3.7 注射渗透后FT表达量的变化 | 第55-56页 |
| 4.3.8 RT-PCR检测FT的表达 | 第56-57页 |
| 4.3.9 瞬时表达蛋白的检测 | 第57页 |
| 4.4 讨论 | 第57-58页 |
| 4.5 小结 | 第58-59页 |
| 第五章 FT蛋白在嫁接桑树中的功能 | 第59-65页 |
| 5.1 材料与试剂 | 第59-60页 |
| 5.1.1 材料 | 第59页 |
| 5.1.2 试验试剂 | 第59页 |
| 5.1.3 试验仪器 | 第59-60页 |
| 5.2 试验方法 | 第60页 |
| 5.2.1 嫁接 | 第60页 |
| 5.2.2 总RNA提取 | 第60页 |
| 5.2.3 Real time PCR | 第60页 |
| 5.2.4 蛋白提取 | 第60页 |
| 5.2.5 Western blot检测FT蛋白 | 第60页 |
| 5.3 结果 | 第60-62页 |
| 5.3.1 Real-time PCR检测嫁接前后FT表达量 | 第60-61页 |
| 5.3.2 桑树叶片与顶芽内总蛋白的提取 | 第61-62页 |
| 5.3.3 FT蛋白的检测 | 第62页 |
| 5.4 讨论 | 第62-64页 |
| 5.5 小结 | 第64-65页 |
| 第六章 农杆菌介导的MAFT基因转化紫花苜蓿的初步研究 | 第65-74页 |
| 6.1 材料与方法 | 第65页 |
| 6.1.1 试验材料 | 第65页 |
| 6.2 试验方法 | 第65-67页 |
| 6.2.1 受体植物材料的准备 | 第65页 |
| 6.2.2 培养基中kan有效工作浓度的确定 | 第65页 |
| 6.2.3 培养基中抑菌抗生素种类的确定 | 第65-66页 |
| 6.2.4 培养基中抑菌抗生素浓度的确定 | 第66页 |
| 6.2.5 侵染用农杆菌菌液浓度的确定 | 第66页 |
| 6.2.6 农杆菌共培养时间的确定 | 第66页 |
| 6.2.7 FT基因转化苜蓿及转基因植株鉴定 | 第66-67页 |
| 6.3 结果 | 第67-72页 |
| 6.3.1 卡那霉素浓度对愈伤组织形成的影响 | 第67-68页 |
| 6.3.2 抑菌抗生素种类对愈伤组织形成的影响 | 第68页 |
| 6.3.3 抑菌抗生素浓度对农杆菌的抑制作用 | 第68-69页 |
| 6.3.4 农杆菌菌液浓度对愈伤组织形成的影响 | 第69-70页 |
| 6.3.5 共培养时间对愈伤组织生长状况的影响 | 第70页 |
| 6.3.6 目的基因FT对紫花苜蓿的转化 | 第70-72页 |
| 6.4 讨论 | 第72-73页 |
| 6.5 小结 | 第73-74页 |
| 第七章 总结 | 第74-75页 |
| 7.1 结论 | 第74页 |
| 7.2 本研究的创新点 | 第74页 |
| 7.3 有待进一步研究的问题 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-87页 |
| 附录 | 第87-102页 |
| 附录一 试验溶液配制 | 第87-94页 |
| 附录二 主要试验方法 | 第94-100页 |
| 附录三 Q-PCR相关曲线 | 第100-102页 |
| 缩略词 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 作者简介 | 第104页 |
