| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 文献综述 | 第11-22页 |
| 1 香蕉条斑病毒的概述 | 第11-14页 |
| ·形态与致病症状 | 第11-12页 |
| ·株系与传播方式 | 第12页 |
| ·BSV基因组结构及其编码蛋白功能 | 第12-14页 |
| 2 病毒生命周期中的互作关系 | 第14-16页 |
| ·病毒生命周期中自身组分间的互作关系 | 第14页 |
| ·病毒生命周期中自身组分与宿主蛋白间的互作关系 | 第14-16页 |
| 3 研究蛋白互作的手段 | 第16-19页 |
| ·酵母双杂交系统的原理、特点及应用 | 第16-18页 |
| ·细菌双杂交系统的原理、特点及应用 | 第18-19页 |
| 4 本研究的立题依据 | 第19-22页 |
| ·研究目的及意义 | 第19-20页 |
| ·主要研究内容 | 第20-21页 |
| ·细菌双杂交试验 | 第20页 |
| ·酵母双杂交试验 | 第20-21页 |
| ·研究技术路线 | 第21-22页 |
| 材料与方法 | 第22-42页 |
| 1 材料与仪器 | 第22-27页 |
| ·材料 | 第22-27页 |
| ·细菌双杂交系统菌株和质粒 | 第22-25页 |
| ·酵母双杂交系统菌株和质粒 | 第25-26页 |
| ·酶、抗体和化学试剂 | 第26-27页 |
| ·主要设备及仪器 | 第27页 |
| 2 方法 | 第27-42页 |
| ·细菌双杂交实验 | 第27-34页 |
| ·寡核苷酸引物的设计 | 第27-28页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·PCR产物回收纯化 | 第29页 |
| ·PCR产物及pBT载体酶切及回收 | 第29-30页 |
| ·连接反应 | 第30页 |
| ·克隆菌株及表达菌株之感受态制备 | 第30-31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31页 |
| ·质粒DNA提取 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第32页 |
| ·重组质粒DNA序列测定 | 第32页 |
| ·重组质粒和空质粒共转化表达菌株 | 第32-33页 |
| ·重组质粒表达产物的毒性鉴定 | 第33页 |
| ·重组质粒的自激活鉴定 | 第33页 |
| ·诱饵质粒和猎物质粒共转化表达菌株E-190感受态细胞 | 第33页 |
| ·利用报告基因筛选阳性共转化子 | 第33-34页 |
| ·酵母双杂交实验 | 第34-42页 |
| ·引物设计 | 第34-35页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·带有attB重组接头的PCR产物的纯化 | 第36-37页 |
| ·BP重组构建入门克隆 | 第37页 |
| ·入门质粒转化克隆菌株 | 第37页 |
| ·菌落PCR鉴定重组质粒 | 第37-38页 |
| ·质粒DNA提取 | 第38-39页 |
| ·测序鉴定 | 第39页 |
| ·LR重组反应 | 第39页 |
| ·重组质粒转化克隆菌株 | 第39页 |
| ·重组质粒的序列及编码框鉴定 | 第39页 |
| ·酵母菌株MaV203表型鉴定 | 第39页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第39-40页 |
| ·转化MaV203感受态细胞 | 第40页 |
| ·诱饵质粒和猎物质粒的毒性检测 | 第40页 |
| ·诱饵质粒和猎物质粒的自激活作用检测 | 第40-41页 |
| ·利用营养缺陷培养基筛选 | 第41页 |
| ·利用X-gal蓝色反应筛选 | 第41-42页 |
| 结果与分析 | 第42-53页 |
| 1 细菌双杂交实验 | 第42-47页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第42页 |
| ·重组质粒的序列、编码框鉴定 | 第42-44页 |
| ·诱饵质粒和猎物质粒的毒性鉴定 | 第44页 |
| ·重组质粒的自激活作用检测 | 第44-47页 |
| ·双杂交试验 | 第47页 |
| 2 酵母双杂交实验 | 第47-53页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第47-48页 |
| ·重组质粒的构建及序列、编码框鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组诱饵质粒及猎物质粒的毒性及自激活鉴定 | 第49-50页 |
| ·酵母菌株MaV203表型鉴定 | 第49页 |
| ·重组质粒的毒性检测 | 第49页 |
| ·重组质粒的自激活作用检测 | 第49-50页 |
| ·利用营养缺陷培养基筛选结果 | 第50-51页 |
| ·利用X-gal筛选结果 | 第51-53页 |
| 讨论与结论 | 第53-59页 |
| 1 讨论 | 第53-58页 |
| ·细菌双杂交试验 | 第53页 |
| ·酵母双杂交试验 | 第53-54页 |
| ·PⅠ和PⅡ蛋白的功能推测 | 第54-55页 |
| ·BSV自身组分与宿主蛋白的互作 | 第55-58页 |
| 2 结论 | 第58-59页 |
| 项目资助 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附录A 缩略词 | 第67-69页 |
| 附录B 常用试剂及缓冲液的配制 | 第69-71页 |